Тест на эндотоксин — EP 2.6.14 / USP <85> / ANSI AAMI ST72 · Фармацевтический анализ

Что такое Endotoxin?

Тест на эндотоксин измеряет количество липополисахарида (эндотоксина), происходящего из клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Эндотоксин термоустойчив: стерилизация убивает бактерию, но не разрушает эндотоксин. Таким образом, стерильный продукт все же может быть пирогенным и его необходимо тестировать отдельно.

Endotoxin: цель

Цель — показать, что уровень эндотоксина в устройствах, которые контактируют с телом через кровоток, спинномозговую жидкость или имплантацию, ниже допустимого предела.

К каким изделиям применяется Endotoxin?

Внутривенные катетеры и инфузионные наборы
Имплантаты
Наборы для диализа
Хирургические инструменты и наборы
Устройства, контактирующие со спинномозговой жидкостью

В каких отраслях применяется Endotoxin?

Медицинское оборудованиеЗдравоохранениеФармацевтика

Стандарты, связанные с Endotoxin

ЕР 2.6.14
Фармакопея США <85>
АНСИ/ААМИ СТ72
ISO 11737-3

Endotoxin: условия

Метод: Гель-сгустковые, турбидиметрические или хромогенные методы ЛАЛ.
Добыча: Поверхности продукта, контактирующие с телом, экстрагируются водой, не содержащей эндотоксинов.
Контроль помех: Необходимо убедиться, что продукт не подавляет и не усиливает тест.

Оборудование для Endotoxin

LAL-тесты и реагенты
Стеклянная посуда без эндотоксинов
Считыватель микропланшетов (для кинетических методов)
Сухожаровая печь (для депирогенизации)
Инкубатор с регулируемой температурой

Требования к образцам для Endotoxin

Готовый стерилизованный продукт
Площадь поверхности, контактирующей с телом, должна быть известна.
Количество образцов определяется в соответствии с фармакопеей и информацией о серии.
Образец необходимо готовить и транспортировать в контейнерах, не содержащих эндотоксинов.

Endotoxin: продолжительность

Первоначальный тест, включая исследование интерференции (ингибирования/усиления), занимает несколько дней; обычные тесты короче.

Endotoxin: порядок проведения

1Рассчитан предел эндотоксина для продукта.
2Проводится исследование интерференции или делается ссылка на существующее исследование.
3Продукт экстрагируется водой, не содержащей эндотоксинов.
4Экстракт смешивают с реагентом ЛАЛ.
5Его инкубируют при определенной температуре.
6В зависимости от метода измеряют образование сгустков, мутность или изменение цвета.
7Количество эндотоксина рассчитывают по стандартной кривой.

Endotoxin: критерии приёмки

Критерием приемлемости является предел эндотоксина, рассчитанный для продукта. Этот предел рассчитывается по формуле, определенной в фармакопее, на основе пути контакта устройства и веса пациента; предел заметно ниже для устройств, контактирующих со спинномозговой жидкостью.

Оценка результатов

Результат сравнивается с рассчитанным пределом. Если исследование интерференции недействительно, результат не может быть интерпретирован; если продукт подавляет реакцию ЛАЛ, необходимо определить коэффициент разбавления.

Endotoxin: протокол

Прикладная фармакопея и метод
Описание образца, партия и площадь поверхности
Расчетный предел эндотоксина
Результат интерференционного исследования и коэффициент разбавления
Измеренное количество эндотоксина (ЕС/устройство или ЕС/мл)
Сравнение с лимитом

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

МЛУ (ЕС) 2017/745
Фармакопейные требования

Фармацевтический анализ — Что охватывает эта область испытаний?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание Endotoxin; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Фармацевтический анализ определяет идентичность, чистоту, количество и свойства активного вещества лекарственного средства и готового продукта. Отличительной чертой этой области является то, что методы в значительной степени определены в ФАРМАКОПЕЯХ: Европейская фармакопея (Ph. Eur.) и Фармакопея Соединённых Штатов (USP) содержат как сами методы, так и рамки их применения.

Обязательный характер метода, предусмотренного фармакопеей, определяет порядок работы в данной области. В то время как в других отраслях лаборатория может выбирать подходящий метод, здесь основополагающим является метод, указанный в монографии; в случае использования альтернативного метода необходимо доказать его эквивалентность. Это обеспечивает сопоставимость результатов во всём мире.

Анализы проводятся в нескольких группах. Идентификация и количественное определение (ВЭЖХ, УФ, титрование) позволяют установить, что представляет собой продукт и какое количество действующего вещества он содержит. Профиль примесей и остаточных растворителей позволяет выявить нежелательные соединения, возникающие в процессе производства. Элементные примеси включают металлы, происходящие из катализаторов и оборудования. Поведение при растворении и распределении является важнейшим показателем in vitro, характеризующим динамику высвобождения препарата в организме.

ЭКСПЕРИМЕНТ ПО РАСТВОРЕНИЮ является одним из наиболее важных измерений в данной области. Недостаточно, чтобы таблетка содержала необходимое количество действующего вещества; это вещество должно растворяться с надлежащей скоростью. Профиль растворения используется для оценки влияния изменений в рецептуре на биодоступность и играет ключевую роль в процессе регистрации дженериков.

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА является обязательным этапом в данном семействе методов. Если используется метод, описанный в фармакопее, подтверждается, что он работает надлежащим образом в условиях данной лаборатории. Если же разработан собственный метод, он валидируется по таким параметрам, как линейность, точность, достоверность, избирательность, пределы обнаружения и определения, а также стабильность. Результаты, полученные с помощью невалидированного метода, не могут быть использованы в досье на получение разрешения.

Исследования стабильности определяют срок хранения и являются самым длительным этапом в данной области. Продукт выдерживается в заданных условиях температуры и влажности, анализируется через определённые промежутки времени, а полученные результаты служат основанием для заявлений о сроке хранения и условиях хранения. Ускоренные испытания дают предварительную информацию, но основное значение имеют данные, полученные в режиме реального времени.

Микробиологическая часть представляет собой отдельный блок: подсчёт микробной нагрузки, поиск определённых микроорганизмов, испытание на стерильность стерильных продуктов и испытание на бактериальные эндотоксины. В случае стерильных продуктов дополнительно проводится проверка целостности упаковки и валидация стерилизации.

Целостность данных в последние годы стала центральной темой инспекций. Недостаточно, чтобы результат был правильным; исходные данные должны быть прослеживаемыми, неизменяемыми и подлежащими аудиту. Валидация систем электронного учёта поэтому стала неотъемлемой частью анализа.

Группы методов в этой области

Идентификация и количественное определение
ВЭЖХ, УЭЖХ, УФ-Вид спектрофотометрия, титрование, подтверждение идентичности методом ИК-Фурье.
Примеси и остатки
Родственные примеси, продукты деградации, остаточные растворители (ГХ-хедспейс), скрининг нитрозаминов.
Элементные примеси
Определение элементных примесей методами ИСП-МС и ИСП-ОЭС и соответствующая оценка риска.
Физико-химический
Растворение и распадаемость, твёрдость, истираемость, однородность дозированных единиц, содержание воды (по Карлу Фишеру), размер частиц.
Микробиологический
Микробный подсчёт, определённые микроорганизмы, стерильность, бактериальный эндотоксин, эффективность консерванта.
Стабильность
Исследования стабильности в реальном времени и ускоренные; фотостабильность и стабильность при использовании.

Часто путаемое в этой области

Фармакопейный метод является обязательным; альтернативный метод можно использовать только при доказательстве его эквивалентности.
Результат, полученный без валидации метода, нельзя использовать в регистрационном досье.
Ускоренная стабильность не заменяет данные реального времени; срок годности подтверждается результатами реального времени.
Профиль растворения чувствителен к типу прибора, скорости перемешивания и среде; условия должны быть полностью указаны в отчёте.
Недостаток целостности данных приводит к несоответствию при инспекции, даже если результат правильный.
Изменение состава или поставщика требует аналитического сравнения и, при необходимости, нового исследования стабильности.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Регистрационное досье и выпуск партии
Определение срока годности и условий хранения
Передача метода и валидация метода
Приёмочный контроль поступающего сырья от поставщиков
Оценка влияния изменения состава на биоэквивалентность

Связанные тесты

Endotoxin: частые вопросы

Мой продукт стерилен — зачем нужен тест на эндотоксины?

Эндотоксин термоустойчив; хотя стерилизация убивает бактерию, она не разрушает эндотоксин, который представляет собой остаток клеточной стенки. Таким образом, стерильный продукт все же может вызвать пирогенную реакцию, и содержание эндотоксина необходимо измерять отдельно.

Как определяют лимит эндотоксина?

Он рассчитывается по формуле, определенной в фармакопее, исходя из пути контакта устройства и разрешенной дозы. Для устройств, контактирующих со спинномозговой жидкостью, предел значительно ниже; расчет должен быть отражен в отчете.