ЖХ-МС анализ

Что такое LC-MS — анализ?

ЖХ-МС — это гибридный метод, в котором компоненты, разделенные жидкостной хроматографией, передаются в масс-спектрометр через интерфейс (обычно ионизация электрораспылением). Хроматография обеспечивает разделение, а измерение массы обеспечивает идентификацию по молекулярной массе.

LC-MS — анализ: цель

Цель состоит в том, чтобы разделить и идентифицировать нелетучие, полярные или термически нестабильные соединения, которые не могут быть проанализированы с помощью ГХ. С помощью этого метода изучаются пептиды, белки, метаболиты лекарств и полярные остатки.

К каким изделиям применяется LC-MS — анализ?

Фармацевтические действующие вещества и их метаболиты
Уровни наркотиков в биологических образцах
Остатки полярных пестицидов и ветеринарных препаратов в продуктах питания
Микотоксины
Характеристика пептидов и белков

В каких отраслях применяется LC-MS — анализ?

ХимияФармацевтикаПищевая продукцияКосметикаОкружающая средаБиотехнологияСельское хозяйство

Стандарты, связанные с LC-MS — анализ

ICH Q2(R2) (валидация аналитических процедур)
Европейская Фармакопея 2.2.43 (масс-спектрометрия)
EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
ЕС 2021/808 (эффективность методов определения остатков ветеринарных препаратов)

LC-MS — анализ: условия

ионизация: ESI является обычным явлением; APCI предпочтителен в неполярных соединениях.
Polarite: Режим положительных или отрицательных ионов — в зависимости от аналита
Hareketli faz: Требуется энергозависимый буфер; Соли, нарушающие ионизацию, не используются.
Matris etkisi: Следует оценить подавление ионов; рекомендуется калибровка по матрице

Оборудование для LC-MS — анализ

Система ВЭЖХ/УЭЖХ
Электрораспыление или источник ионов APCI
Масс-анализатор (одиночный квадруполь или высокого разрешения)
Вакуумная система и генератор азота
Программное обеспечение для обработки данных

Требования к образцам для LC-MS — анализ

Образец должен быть растворим в летучем буфере.
Не должно содержать солей и моющих средств, нарушающих ионизацию.
Белковое осаждение или ТФЭ применяется для биологических образцов.
Образец должен быть отправлен в холодную цепь.

LC-MS — анализ: продолжительность

Обычно пробежка длится менее 30 минут. Если требуется разработка метода и оценка матричного эффекта, общая продолжительность значительно увеличивается.

LC-MS — анализ: порядок проведения

1Пробу извлекают и очищают от мешающих компонентов.
2Добавлен внутренний стандарт.
3Разделение проводят на колонке ЖХ.
4Выход колонки подается к источнику ионов, и компоненты ионизируются.
5Регистрируют масс-спектр.
6Идентификация осуществляется путем согласования массы и времени удерживания.
7Количественное определение рассчитывается по внутреннему стандарту.

LC-MS — анализ: критерии приёмки

Метод дает результат; он не устанавливает предела. Приемлемость результата определяется нормативными актами или спецификациями, которым подчиняется продукт.

Оценка результатов

Подавление ионов является наиболее важным источником ошибок в ЖХ-МС; Поэтому используется внутренний стандарт и, где это возможно, стандарт, меченный изотопами. Надежность результата зависит от эффекта матрицы, измеренного во время валидации метода.

LC-MS — анализ: протокол

Описание образца, дата получения и номер лаборатории
Примененный метод и эталонный стандарт, если таковой имеется.
Прибор и условия измерения
Этапы подготовки проб
Результаты измерений и единицы измерения
Неопределенность измерения (по запросу)
Заявление о том, что результаты относятся только к образцу, представленному на тестирование.

Аккредитация

EUROLAB имеет международно признанную аккредитацию, полученную от органов по аккредитации, являющихся участниками многосторонних соглашений о признании IAF и ILAC, в соответствии с ISO/IEC 17025 для лабораторных испытаний, ISO/IEC 17020 для инспекций и надзора, а также ISO/IEC 17021-1 и ISO/IEC 17065 для сертификации систем и продукции. Эта цепочка гарантирует, что выданные отчеты и сертификаты принимаются по всему миру.

Возможность проведения этого теста в рамках аккредитованной области зависит от вашего продукта и применяемого стандарта; поскольку аккредитация основана на методе, объем работ подтверждается в письменной форме на этапе предложения.

Область применения и разрешения

Соответствующие правила

ЕС 37/2010 (пределы содержания ветеринарных препаратов)
ЕС 2023/915 (загрязнения в пищевых продуктах)
ICH M10 (валидация биоаналитического метода)

Страницы, на которых используется этот метод

Аналитические методы — Что делает эта группа методов?

В разделе ниже описывается область, к которой относится испытание LC-MS — анализ; условия и критерии приемки именно этого испытания приведены в разделах выше. Объём, специфичный для вашего продукта, подтверждается письменно на этапе коммерческого предложения.

Страницы об аналитических методах — это страницы о МЕТОДЕ ИЗМЕРЕНИЯ, а не об испытании. Это различие важно: «испытание соляным туманом» — это испытание, отвечающее на один вопрос; «ИСП-МС» — это метод, используемый в десятках различных испытаний. Иногда пользователь ищет не испытание, а метод — потому что именно название метода фигурирует в его спецификации.

Это различие становится решающим при выборе лаборатории. Когда клиент просит «анализ тяжёлых металлов», настоящий вопрос заключается в том, каким методом он будет выполнен: РФА быстр и неразрушающий, но не различает соединения; ААС экономичен для одного элемента; ИСП-АЭС определяет несколько элементов; ИСП-МС видит следовые уровни. Один и тот же образец даёт результаты с разными пределами обнаружения и разной неопределённостью в четырёх методах.

Выбор метода производится по трём критериям. ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ: находится ли искомая концентрация в диапазоне, который может определить метод? СОВМЕСТИМОСТЬ С МАТРИЦЕЙ: способен ли метод работать с матрицей образца (пластик, продукт питания, почва, металл), и требуется ли предварительная обработка? СВЯЗЬ СО СПЕЦИФИКАЦИЕЙ: требует ли стандарт на продукцию или законодательство определённого метода? Третий критерий часто перевешивает первые два — спецификация связывает метод.

Страницы методов создают ЦЕПОЧКУ. Методика связана с тестовыми страницами, на которых она используется, со стандартами, на которых основаны эти тесты, с законодательством, с которым связаны эти стандарты, и, в конечном итоге, с режимами доступа к рынку. Цепочка примеров в исходном документе работает следующим образом: РФА → анализ металлов → соответствие RoHS → ограничение содержания тяжелых металлов → страницы с покрытием. По какой бы ссылке пользователь ни перешел, он попадает и на другие.

Подготовка проб – это невидимая половина результата в этом семействе, и она является более серьезным источником ошибок, чем сама методика. Метод разложения, степень измельчения, растворитель для экстракции и степень разбавления заметно меняют результат. Один и тот же образец на одном и том же приборе дает разные результаты при разной подготовке; следовательно, определение метода охватывает и подготовку.

Калибровка и проверка являются третьим определяющим компонентом. Прибор калибруется с использованием сертифицированного эталонного материала, калибровочная кривая периодически проверяется, и в каждой партии отбирается контрольный образец. Без этих действий полученное число невозможно отследить, даже если прибор работает правильно.

Группы методов в этой области

Элементный анализ
ИСП-ОЭС, ИСП-МС, ААС и РФА. Они различаются пределом обнаружения, допуском матрицы и многоэлементной емкостью.
Хроматография
ГХ, ГХ-МС, ВЭЖХ, ЖХ-МС/МС и ионная хроматография. Он разделяет смесь на компоненты и измеряет каждый отдельно.
Спектроскопия
FTIR, комбинационное рассеяние, УФ-Вид и оптическое излучение. Для идентификации материала, идентификации функциональных групп и состава сплава.
Термический анализ
ДСК, ТГА, ДМА и дилатометрия. Температуры перехода, состав, разложение и размерное поведение.
Микроскопия и визуализация
Оптическая микроскопия, SEM-EDS, рентгенография и томография. Структура, дефекты и распределение элементов.
Классическая («мокрая») химия
Титрование, гравиметрия и колориметрия. Используется в качестве эталонного метода и при подтверждении инструментальных результатов.

Часто путаемое в этой области

XRF — инструмент проверки; он видит элементы и не различает соединения. Решение об ограниченном соединении требует подтверждения методом влажной химии.
Формулировка «не обнаружено» не является доказательством отсутствия; она читается вместе с пределом обнаружения метода.
Спецификация связывает метод. Технически лучший метод не принимается, если спецификация требует другого.
Подготовка проб является частью результата; отчет, в котором не указано, что препарат не воспроизводим.
Результаты, полученные разными методами, нельзя сравнивать напрямую; их пределы обнаружения и неопределенности различаются.
Страница метода не является тестовой страницей; какой метод применяется к какому испытанию взят из стандарта на продукцию.

Какие решения подкрепляют эти результаты

Сопоставление метода из спецификации с областью аккредитации лаборатории
Выбор метода по пределу обнаружения и совместимости с матрицей
Подтверждение инструментального результата эталонным методом
Устранение отклонений, связанных с пробоподготовкой

Связанные тесты

LC-MS — анализ: частые вопросы

В чем разница между ЖХ-МС и ЖХ-МС/МС?

ЖХ-МС выполняет одно измерение массы. ЖХ-МС/МС выбирает и фрагментирует ион-предшественник и контролирует ионы-продукты; он гораздо более избирательен и имеет нижний предел количественного определения в сложных матрицах.

Зачем нужен энергозависимый буфер?

Нелетучие соли накапливаются в источнике ионов, подавляя сигнал и загрязняя прибор. Поэтому используются летучие буферы, такие как муравьиная кислота или ацетат аммония.