Allergenanalyse — ELISA / PCR / LC-MS/MS und Allergene in Kosmetika · Kosmetikprüfungen

Was ist Allergen?

Die Allergenanalyse umfasst zwei getrennte Bereiche. Das Vorhandensein und die Menge der in Anhang II der FOOD (EU) 1169/2011 aufgeführten Allergene werden durch ELISA, Echtzeit-PCR oder LC-MS/MS bestimmt; Der R5-ELISA für Gluten ist weit verbreitet. In der Kosmetik werden Parfümallergene, die gemäß Anhang III (EG) 1223/2009 kennzeichnungspflichtig sind, mittels GC-MS gemessen.

Zweck von Allergen

Ziel ist es, die Richtigkeit der Etikettendeklaration und die Wirksamkeit der Kreuzkontaminationskontrolle zu überprüfen. Nicht deklarierte Allergene sind eine der häufigsten Ursachen für Lebensmittelrückrufe.

Bei welchen Produkten wird Allergen angewendet?

Als glutenfrei deklarierte Produkte
Backwaren und Snacks
Produkte, die als milch- und haselnussfrei deklariert sind
Fertiggerichte und Soßen
Parfümierte Kosmetikprodukte

In welchen Branchen wird Allergen eingesetzt?

LebensmittelLandwirtschaftEinzelhandelKosmetika

Normen zu Allergen

TS EN 15634-Reihe (Allergennachweis in Lebensmitteln — allgemeine Annahmen und PCR-Methoden)
AOAC 2012.01 (Bestimmung von Gluten durch R5 ELISA)
TS EN ISO 21571 (Nukleinsäureextraktion)
ISO/TS 20224-Reihe (Tierartenbestimmung, Echtzeit-PCR)
TS EN 16274-Reihe (Bestimmung allergener Geruchsstoffe in Kosmetika mittels GC-MS)

Prüfbedingungen für Allergen

Methodenauswahl: Protein hedefliyse ELISA/LC-MS, DNA hedefliyse PCR
Verarbeitungseffekt: Eine Wärmebehandlung kann das Protein denaturieren und das ELISA-Ergebnis verschlechtern
Gluten: Durch R5 ELISA; Definierter Schwellenwert für die Deklaration „glutenfrei“.
Kozmetik alerjen: In Anhang III aufgeführte Substanzen werden mittels GC-MS untersucht

Prüfgerät für Allergen

ELISA-Plattenlesegerät und Inkubator
Echtzeit-PCR-System
LC-MS/MS
GC-MS (für kosmetische Allergene)
Homogenisator und Mahlwerk

Probenanforderungen für Allergen

Homogenisierte repräsentative Probe
Zur Untersuchung einer Kreuzkontamination können auch Leitungsabstrichproben entnommen werden.
Verarbeitungsparameter müssen deklariert werden
Parfümzusammensetzung und INCI-Liste müssen in Kosmetika angegeben werden

Dauer von Allergen

ELISA-Ergebnisse liegen relativ schnell vor. PCR- und LC-MS/MS-Analysen dauern mehrere Arbeitstage; Das Screening kosmetischer Allergene dauert aufgrund der GC-MS-Messung ähnlich lange.

Ablauf von Allergen

1Das Zielallergen und die geeignete Methode werden bestimmt.
2Die Probe wird homogenisiert und extrahiert.
3Beim ELISA erfolgt eine antikörperbasierte Messung.
4Bei der PCR kommen DNA-Extraktion und artspezifische Amplifikation zum Einsatz.
5Zielpeptide werden in LC-MS/MS gemessen.
6In Kosmetika werden allergene Duftstoffe mittels GC-MS gescreent.

Annahmekriterien für Allergen

In der Lebensmittelverordnung (EU) 1169/2011 müssen Allergene des Anhangs II in der Zutatenliste hervorgehoben angegeben werden. Es legt den in der Verordnung (EU) 828/2014 definierten Schwellenwert für die Angabe „glutenfrei“ fest. Anhang III der Kosmetikverordnung (EG) 1223/2009 verlangt, dass gelistete Parfümallergene gesondert auf dem Etikett angegeben werden, wenn sie in bestimmten Konzentrationen vorhanden sind.

Auswertung der Ergebnisse

Ein negatives Ergebnis ist auf die Nachweisgrenze der Methode beschränkt und garantiert nicht „allergenfrei“. Darüber hinaus kann die Verarbeitung das Zielprotein verändern und so das ELISA-Ergebnis verschlechtern. In diesem Fall ist PCR oder LC-MS/MS zuverlässiger. Das Kreuzkontaminationsmanagement wird durch Produktionstrennung und Reinigungsüberprüfung und nicht durch Analyse erreicht.

Prüfbericht zu Allergen

Probenbeschreibung und Zielallergenliste
Die angewandte Methode und ihre Begründung
Ergebnis und Nachweisgrenze für jedes Allergen
Informationen zu Verarbeitungsparametern
Vergleich der gesetzlichen Schwellenwerte oder Erklärungen

Akkreditierung

EUROLAB verfügt über eine international anerkannte Akkreditierung, die von Akkreditierungsstellen erhalten wurde, die Vertragspartei der multilateralen Anerkennungsvereinbarungen IAF und ILAC sind, gemäß ISO/IEC 17025 für Labortests, ISO/IEC 17020 für Inspektion und Überwachung sowie ISO/IEC 17021-1 und ISO/IEC 17065 für System- und Produktzertifizierung. Diese Kette stellt sicher, dass die ausgestellten Berichte und Zertifikate weltweit akzeptiert werden.

Ob dieser Test im akkreditierten Rahmen angeboten werden kann, hängt von Ihrem Produkt und der angewandten Norm ab; Da die Akkreditierung methodenbasiert erfolgt, wird der Umfang bereits im Angebotsstadium schriftlich bestätigt.

Geltungsbereich und Berechtigungen

Kozmetik Testleri — Was umfasst dieser Prüfbereich?

Der folgende Abschnitt beschreibt das Gebiet, zu dem der Test Allergen gehört; die Bedingungen und Abnahmekriterien dieses konkreten Tests stehen in den obigen Abschnitten. Der für Ihr Produkt spezifische Umfang wird schriftlich im Angebotsstadium festgelegt.

Kosmetikprüfungen zeigen, dass ein Produkt während der gesamten Nutzungsdauer mikrobiologisch sicher bleibt, die beanspruchte Leistung erbringt und keine eingeschränkten Stoffe enthält. In dieser Familie gibt es KEINE PRODUKTZULASSUNG: Keine Behörde genehmigt ein Kosmetikprodukt; die Verantwortung liegt vollständig beim Hersteller und bei der in der EU niedergelassenen verantwortlichen Person.

Dieses Verantwortungsmodell prägt die Arbeitsweise des Bereichs. Bevor das Produkt in Verkehr gebracht wird, wird eine Produktinformationsdatei (PIF) erstellt, eine Sicherheitsbewertung (CPSR) durchgeführt und die Meldung abgeschlossen. Die Kontrolle erfolgt später und verlangt die Akte; ist sie unvollständig, wird das Produkt vom Markt genommen. Prüfberichte bilden die Beweisgrundlage dieser Akte.

Auf mikrobiologischer Seite gibt es zwei unterschiedliche Fragen, die jeweils durch eine eigene Prüfung beantwortet werden. Die AKTUELLE mikrobiologische Qualität des Produkts wird durch Auszählung und Prüfung auf bestimmte Mikroorganismen gemessen. Die WIRKSAMKEIT des Konservierungssystems wird geprüft, indem das Produkt absichtlich mit Mikroorganismen beimpft wird (Challenge-Test): Kann das Produkt wiederholter Kontamination während der Nutzung widerstehen? Ein Cremetiegel wird bei jeder Anwendung mit dem Finger berührt; das Konservierungssystem muss das bewältigen.

Auf der Leistungsseite werden Studien zur Untermauerung von Werbeaussagen durchgeführt. Bei Sonnenschutzmitteln sind die Bestimmung von LSF und UVA-Schutz sowie die Messung der Wasserfestigkeit verpflichtend und Grundlage des auf dem Etikett angegebenen Werts. Auch für Aussagen wie Feuchtigkeitsspendung, Faltenerscheinung, Haarpflege und Farberhalt werden Nachweise mit In-vivo- oder In-vitro-Methoden erbracht.

Auf der chemischen Seite wird auf verbotene und eingeschränkte Stoffe geprüft: Schwermetalle, verbotene Farbstoffe, Konservierungsstoffkonzentrationen, UV-Filtermengen und Kontaminanten wie Nitrosamine. Produkte mit Nanomaterialien unterliegen einer gesonderten Meldepflicht.

Das VERBOT VON TIERVERSUCHEN ist die prägendste Einschränkung des Bereichs. An Fertigprodukten und Inhaltsstoffen dürfen keine Tierversuche durchgeführt werden, und ein an Tieren getestetes Produkt darf nicht in Verkehr gebracht werden. Alternative In-vitro-Methoden (rekonstruierte menschliche Hautmodelle, zellkulturbasierte Tests) stehen daher im Zentrum des Bereichs, und die toxikologische Bewertung stützt sich weitgehend auf vorhandene Daten, Read-Across-Ansätze und In-vitro-Ergebnisse.

Stabilitäts- und Verpackungsverträglichkeitsstudien bestimmen die Haltbarkeit und die Verwendungsdauer nach Anbruch (PAO). Auch die Wechselwirkung des Produkts mit seiner Verpackung wird bewertet: Ein Wirkstoff kann in die Verpackung migrieren, und Stoffe, die im Produkt nicht vorhanden sein sollten, können von der Verpackung in das Produkt übergehen.

Auf der Prozessseite wird die gute Herstellungspraxis durch ISO 22716 nachgewiesen; dies ist von der Produktprüfung getrennt, aber ein verpflichtender Teil der Akte.

Methodengruppen in diesem Bereich

Mikrobiologische Qualität
Auszählung aerober mesophiler Bakterien, Hefen und Schimmelpilze; Prüfung auf Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans und E. coli.
Konservierungswirksamkeit
Widerstandsfähigkeit des Konservierungssystems gegen wiederholte Kontamination durch Challenge-Test (ISO 11930).
Sonnenschutz
In-vivo-LSF-Bestimmung, In-vitro-UVA-Schutzbestimmung, Wasserfestigkeit und Messungen der kritischen Wellenlänge.
Chemische Analyse
Schwermetalle, verbotene und eingeschränkte Stoffe, Mengenbestimmung von Konservierungsstoffen und UV-Filtern, Kontaminantenscreening.
Sicherheitsbewertung
In-vitro-Methoden für Reizung und Sensibilisierung, toxikologische Risikobewertung, Expositionsberechnungen.
Stabilität und Verträglichkeit
Echtzeit- und beschleunigte Stabilität, Verpackungsverträglichkeit, PAO-Bestimmung, sensorische und physikalisch-chemische Überwachung.

Häufig verwechselt in diesem Bereich

Auf Kosmetika gibt es KEINE CE-Kennzeichnung; die Konformität wird durch die PIF, die Sicherheitsbewertung und die Meldung nachgewiesen.
Die verantwortliche Person muss in der EU niedergelassen sein; übernimmt der Exporteur dies nicht, kann das Produkt nicht in Verkehr gebracht werden.
Mikrobiologische Qualität und Konservierungswirksamkeit sind unterschiedliche Prüfungen; ein sauberes Ergebnis kann trotzdem ein schwaches Konservierungssystem verbergen.
Das Tierversuchsverbot gilt auch für Inhaltsstoffe; Tierversuchsdaten, die für einen anderen Markt erzeugt wurden, führen zu einem Nutzungsproblem.
Eine LSF-Aussage muss durch Messung belegt werden; eine Änderung der Formulierung erfordert eine neue Messung.
Eine Änderung der Verpackung kann die Wiederholung der Stabilitäts- und Verträglichkeitsstudien erforderlich machen.

Welche Entscheidungen diese Ergebnisse unterstützen

Die Produktinformationsdatei und die Sicherheitsbewertung
Verifizierung der Auslegung des Konservierungssystems
Untermauerung von LSF- und Wirksamkeitsaussagen
Bestimmung der Haltbarkeit und der Verwendungsdauer nach Anbruch
Einhaltung der Beschränkungen des Zielmarkts beim Export

Häufige Fragen zu Allergen

Sollten wir nicht eine Analyse anstelle einer „Kann enthalten“-Warnung haben?

Die Analyse ist Teil des Nachweises, dass das Risiko einer Kreuzkontamination beherrscht wird, sie allein reicht jedoch nicht aus. Der Warnhinweis muss auf einer echten Risikobewertung beruhen; Die Analyse unterstützt diese Einschätzung, ersetzt sie jedoch nicht.

Warum ist ELISA bei wärmebehandelten Produkten niedrig?

Eine Wärmebehandlung verändert die Struktur des Proteins und kann die vom Antikörper erkannten Regionen zerstören. In diesem Fall kann das Ergebnis niedriger sein als die Wahrheit; Geeigneter wäre eine DNA-gezielte PCR oder eine peptidgezielte LC-MS/MS.

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