Microbial Limits

Qu'est-ce que Microbial Limits ?

Les tests de limites microbiennes évaluent la qualité microbiologique des produits qui ne doivent pas nécessairement être stériles. Ils comprennent deux parties : le décompte total des micro-organismes aérobies ainsi que le décompte total des levures et des moisissures (Ph. Eur. 2.6.12) et les tests de micro-organismes spécifiés déterminés par catégorie de produit (Ph. Eur. 2.6.13).

Objectif de Microbial Limits

Le but est de montrer que le produit répond aux critères de qualité microbiologique et est exempt des agents pathogènes spécifiés. Les critères varient selon la voie d'administration du produit.

À quels produits Microbial Limits s'applique-t-il ?

Formes orales solides et liquides
Crèmes, gels et onguents topiques
Produits pour inhalation
Médicaments à base de plantes
Excipients

Dans quels secteurs Microbial Limits est-il utilisé ?

MédicamentsBiotechnologieProduits de beauté

Normes relatives à Microbial Limits

Ph.Eur. 2.6.12 (tests de dénombrement microbien)
Ph.Eur. 2.6.13 (essai pour les micro-organismes spécifiés)
Ph.Eur. 5.1.4 (qualité microbiologique des produits non stériles)
USP <61>, <62> et <1111>

Conditions de Microbial Limits

Adéquation de la méthode: Il faut vérifier que l'effet antimicrobien du produit a été neutralisé
Incubation: Milieux, température et durées définis dans la pharmacopée
Micro-organismes spécifiés: La liste à tester varie selon la voie d'administration

Équipement pour Microbial Limits

Armoire stérile et incubateurs
Configuration de filtration membranaire
Système d'autoclave et de préparation des médias
Compteur de colonies

Exigences d'échantillon pour Microbial Limits

Spécimen dans son emballage d'origine non ouvert
Un spécimen supplémentaire est requis pour l’étude d’adéquation de la méthode
La voie d'administration du produit doit être indiquée — elle détermine quels micro-organismes sont testés
Les informations sur la formulation et le système de conservation doivent être fournies

Durée de Microbial Limits

Le dénombrement et les tests pour certains micro-organismes durent aussi longtemps que les périodes d'incubation définies dans la pharmacopée. Si l’étude d’adéquation de la méthode est réalisée pour la première fois, elle s’allonge.

Procédure de Microbial Limits

1L'adéquation de la méthode est vérifiée ; l'effet antimicrobien du produit est neutralisé.
2L'échantillon est préparé de manière aseptique.
3L’étalement est effectué pour le nombre total de microbes aérobies.
4Un placage séparé est effectué pour le nombre de levures et de moisissures.
5Les micro-organismes spécifiés sont testés selon la voie d'administration.
6Les résultats sont comparés aux critères de la pharmacopée.

Critères d'acceptation de Microbial Limits

Ph.Eur. 5.1.4 définit les limites microbiennes acceptables et les micro-organismes spécifiés à rechercher, par voie d'administration. Les critères diffèrent pour les produits oraux, topiques et par inhalation. Le critère d'acceptation n'est pas indiqué sur cette page : pour chaque substance active et chaque produit, la limite provient de la monographie de la pharmacopée concernée ou de la spécification approuvée dans le dossier d'autorisation de mise sur le marché. Le chapitre général de la pharmacopée définit la méthode ; la monographie fixe la limite.

Évaluation des résultats

L'étude d'adéquation de la méthode est incontournable : si le système de conservation du produit n'est pas neutralisé, les micro-organismes ne peuvent pas se développer sur le support et le résultat est meilleur qu'il ne l'est réellement. Il s’agit de l’erreur la plus courante dans les tests de limites microbiennes.

Rapport de Microbial Limits

Identification du produit, lot et voie d'administration
Résultats de l’étude d’adéquation des méthodes
Nombre total de substances aérobies et nombre de levures/moisissures
Micro-organismes spécifiés testés et leurs résultats
Critères de la pharmacopée comparés aux

Accréditation

EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.

La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.

Portée et autorisations

Règlements connexes

Directive 2001/83/CE relative aux médicaments à usage humain
Guide BPF (EudraLex Volume 4)

Analyse pharmaceutique — Que couvre ce domaine d'essai ?

La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai Microbial Limits ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.

L'analyse pharmaceutique permet de déterminer l'identité, la pureté, la quantité et le comportement du principe actif d'un médicament et du produit fini. Ce qui distingue cette discipline des autres, c'est que les méthodes sont en grande partie définies dans les pharmacopées : la Pharmacopée européenne (Ph. Eur.) et la Pharmacopée des États-Unis (USP) fournissent à la fois la méthode et le cadre de référence.

Le caractère contraignant de la méthode de la pharmacopée détermine le mode de fonctionnement du secteur. Alors que dans d'autres secteurs, un laboratoire peut choisir une méthode appropriée, ici, c'est la méthode décrite dans la monographie qui fait autorité ; si une méthode alternative doit être utilisée, il faut en démontrer l'équivalence. Cela garantit la comparabilité des résultats à l'échelle mondiale.

Les analyses sont réalisées selon plusieurs groupes. L'identification et la quantification (HPLC, UV, titrage) permettent de déterminer la nature du produit et sa teneur en principe actif. Le profil d'impuretés et les résidus de solvants permettent de détecter les composés indésirables issus du processus de fabrication. Les impuretés élémentaires concernent les métaux provenant des catalyseurs et des équipements. Le comportement de dissolution et de dispersion constitue le principal indicateur in vitro du comportement de libération du médicament dans l'organisme.

L'ESSAI DE DISSOLUTION est l'une des mesures les plus critiques dans ce domaine. Il ne suffit pas qu'un comprimé contienne la quantité adéquate de principe actif ; celui-ci doit également se dissoudre à une vitesse appropriée. Le profil de dissolution sert à évaluer l'impact des modifications de la formulation sur la biodisponibilité et occupe une place centrale dans l'autorisation de mise sur le marché des médicaments génériques.

La VALIDATION DE LA MÉTHODE est une étape obligatoire dans cette famille. Si la méthode de la pharmacopée est utilisée, on vérifie qu'elle fonctionne correctement dans les conditions propres à ce laboratoire. Si une méthode propre a été mise au point, elle est validée à l'aide de paramètres tels que la linéarité, la précision, l'exactitude, la sélectivité, les limites de détection et de quantification, ainsi que la robustesse. Les résultats obtenus à l'aide d'une méthode non validée ne peuvent pas être utilisés dans le dossier d'autorisation de mise sur le marché.

Les essais de stabilité déterminent la durée de conservation et constituent le processus le plus long dans ce domaine. Le produit est conservé dans des conditions de température et d'humidité définies, puis analysé à intervalles réguliers ; les résultats servent de base à l'établissement de la durée de conservation et des conditions de stockage. Les essais en conditions accélérées fournissent des informations préliminaires, mais les données en temps réel sont essentielles.

Le volet microbiologique constitue un domaine à part entière : comptage de la charge microbienne, recherche de micro-organismes ciblés, test de stérilité des produits stériles et test de détection des endotoxines bactériennes. Pour les produits stériles, l'intégrité de l'emballage et la validation de la stérilisation entrent également en ligne de compte.

L'intégrité des données est devenue ces dernières années le point central des inspections. Il ne suffit pas que le résultat soit correct ; les données brutes doivent être traçables, inaltérables et auditables. La validation des systèmes d'enregistrement électronique est ainsi devenue une part indissociable de l'analyse.

Groupes de méthodes dans ce domaine

Identité et dosage
HPLC, UPLC, spectrophotométrie UV-Vis, titrage, confirmation d'identité par FTIR.
Impuretés et résidus
Impuretés apparentées, produits de dégradation, solvants résiduels (GC-headspace), criblage des nitrosamines.
Impuretés élémentaires
Détermination des impuretés élémentaires par ICP-MS et ICP-OES et évaluation du risque associée.
Physico-chimique
Dissolution et désagrégation, dureté, friabilité, uniformité des unités de dose, teneur en eau (Karl Fischer), taille des particules.
Microbiologique
Dénombrement microbien, micro-organismes spécifiés, stérilité, endotoxine bactérienne, efficacité du conservateur.
Stabilité
Études de stabilité en temps réel et accélérée ; photostabilité et stabilité en cours d'utilisation.

Confusions fréquentes dans ce domaine

La méthode pharmacopéique est contraignante ; une méthode alternative ne peut être utilisée qu'en démontrant son équivalence.
Un résultat produit sans validation de méthode ne peut être utilisé dans un dossier d'autorisation.
La stabilité accélérée ne remplace pas les données en temps réel ; la durée de conservation est étayée par des résultats en temps réel.
Le profil de dissolution est sensible au type d'appareil, à la vitesse d'agitation et au milieu ; les conditions doivent être complètes dans le rapport.
Une lacune dans l'intégrité des données produit une non-conformité lors d'une inspection, même si le résultat est correct.
Un changement de formulation ou de fournisseur nécessite une comparaison analytique et, si besoin, une nouvelle étude de stabilité.

Quelles décisions ces résultats étayent

Le dossier d'autorisation et la libération des lots
Détermination de la durée de conservation et des conditions de stockage
Transfert de méthode et validation de méthode
Contrôle d'acceptation des matières premières entrantes des fournisseurs
Évaluation de l'effet d'un changement de formulation sur la bioéquivalence

Tests associés

Questions fréquentes sur Microbial Limits

L’adéquation de la méthode doit-elle être répétée pour chaque lot ?

Non, cela se fait une fois par produit et reste valable sauf changement de formulation ou de méthode. Elle devra toutefois être refaite si la formulation, le système de conservation ou la méthode changent.