Ανάλυση HPLC

Τι είναι η HPLC — ανάλυση;

Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης βασίζεται στη διέλευση του δείγματος μέσω μιας συσσωρευμένης στήλης υπό πίεση με μια υγρή κινητή φάση. Τα εξαρτήματα κινούνται με διαφορετικές ταχύτητες ανάλογα με τη συγγένειά τους για τη στατική φάση και εγκαταλείπουν τη στήλη σε διαφορετικούς χρόνους. μετρώνται με ανιχνευτή UV, DAD, φθορισμού ή δείκτη διάθλασης.

Σκοπός της HPLC — ανάλυση

Σκοπός είναι να διαχωριστούν θερμικά ασταθείς ή μη πτητικές ενώσεις χωρίς να αποικοδομηθούν και να προσδιοριστεί η ποσότητα τους. Ο προσδιορισμός ενεργών συστατικών και το προφίλ ακαθαρσιών στα φαρμακευτικά προϊόντα, και ο προσδιορισμός προσθέτων και βιταμινών στα τρόφιμα, γίνονται με αυτήν την τεχνική.

Σε ποια προϊόντα εφαρμόζεται η HPLC — ανάλυση;

Φαρμακευτικά ενεργά συστατικά και τελικά προϊόντα
Πρόσθετα τροφίμων, συντηρητικά και γλυκαντικά
Παρασκευάσματα και συμπληρώματα βιταμινών
Συντηρητικά και φίλτρα UV σε καλλυντικά προϊόντα
Πολυμερή πρόσθετα και αντιοξειδωτικά

Σε ποιους τομείς χρησιμοποιείται η HPLC — ανάλυση;

ΧημείαΦαρμακευτικάΤρόφιμαΚαλλυντικάΠεριβάλλονΒιοτεχνολογίαΛιανική πώληση

Πρότυπα σχετικά με τη HPLC — ανάλυση

European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) γενικό κεφάλαιο 2.2.29 — υγρή χρωματογραφία
USP <621> (χρωματογραφία)
ICH Q2(R2) (επικύρωση αναλυτικών διαδικασιών)
EN 12856 / EN 12857 (προσδιορισμός γλυκαντικών και προσθέτων στα τρόφιμα)

Συνθήκες της HPLC — ανάλυση

Kolon: Το γέμισμα και το μέγεθος καθορίζονται στο πρότυπο μεθόδου
Hareketli faz: Αναλογία ρυθμιστικού διαλύματος/οργανικού διαλύτη που ορίζεται στη μέθοδο. ισοκρατική ή κλίση
Μήκος κύματος ανιχνευτή: Καθορίζεται στη μέθοδο σύμφωνα με το μέγιστο απορρόφησης της αναλυόμενης ουσίας
Καταλληλότητα συστήματος: Κριτήρια διαλυτότητας, ουράς και αναπαραγωγιμότητας που ορίζονται στη φαρμακοποιία

Εξοπλισμός για τη HPLC — ανάλυση

Αντλία υψηλής πίεσης και μονάδα κλίσης
Αυτόματη δειγματοληψία
Φούρνος στήλης και αναλυτικές στήλες
Ανιχνευτής UV / DAD / φθορισμού / RI
Σύστημα δεδομένων χρωματογραφίας

Απαιτήσεις δείγματος για τη HPLC — ανάλυση

Το δείγμα πρέπει να είναι διαλυτό στην κινητή φάση
Απαιτείται διήθηση (γενικά 0,45 µm ή λιγότερο) για να αποφευχθεί η απόφραξη της στήλης
Η άλεση και η εκχύλιση εφαρμόζονται για στερεές δοσολογικές μορφές
Η ποσότητα του δείγματος ποικίλλει ανάλογα με τη σύνθεση. μερικά γραμμάρια είναι γενικά αρκετά
Πρέπει να κοινοποιούνται πληροφορίες για τα δραστικά συστατικά και τα έκδοχα

Διάρκεια της HPLC — ανάλυση

Ένα μόνο τρέξιμο είναι γενικά μεταξύ 10-60 λεπτών. Με τις δοκιμές καταλληλότητας του συστήματος, τη βαθμονόμηση και τις επαναλαμβανόμενες εγχύσεις, η συνήθης αναφορά διαρκεί μερικές εργάσιμες ημέρες.

Διαδικασία της HPLC — ανάλυση

1Το δείγμα διαλύεται, αραιώνεται και διηθείται.
2Καταρτίζονται πρότυπα βαθμονόμησης.
3Πραγματοποιείται έλεγχος καταλληλότητας συστήματος και η ανάλυση δεν προχωρά μέχρι να ικανοποιηθούν τα κριτήρια.
4Το δείγμα εγχέεται στη στήλη και το χρωματογράφημα καταγράφεται.
5Οι κορυφές αναγνωρίζονται από το χρόνο συγκράτησης.
6Οι περιοχές κορυφής αξιολογούνται σύμφωνα με την καμπύλη βαθμονόμησης.
7Το αποτέλεσμα επαληθεύεται με δείγματα ποιοτικού ελέγχου.

Κριτήρια αποδοχής της HPLC — ανάλυση

Τα όρια περιεκτικότητας σε ενεργά συστατικά και προσμίξεων προέρχονται από τη φαρμακοποιία ή τον φάκελο καταχώρισης. στα τρόφιμα και τα καλλυντικά ισχύει ο σχετικός κανονισμός για τα πρόσθετα. Η ίδια η μέθοδος δεν ορίζει όριο.

Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων

Τα αποτελέσματα υπολογίζονται από την καμπύλη βαθμονόμησης. Σε ένα εργαστήριο όπου η μέθοδος έχει επικυρωθεί, η γραμμικότητα, η ανάκτηση, η επαναληψιμότητα και το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζονται εκ των προτέρων. η τιμή στην αναφορά έχει νόημα εντός αυτού του επικυρωμένου εύρους.

Έκθεση της HPLC — ανάλυση

Περιγραφή δείγματος, ημερομηνία παραλαβής και αριθμός εργαστηρίου
Εφαρμοσμένη μέθοδος και πρότυπο αναφοράς, εάν υπάρχει
Όργανο και συνθήκες μέτρησης
Βήματα προετοιμασίας δειγμάτων
Αποτελέσματα μέτρησης και μονάδες
Αβεβαιότητα μέτρησης (εάν ζητηθεί)
Δήλωση ότι τα αποτελέσματα αφορούν μόνο το δείγμα που υποβλήθηκε για δοκιμή

Διαπίστευση

Η EUROLAB κατέχει διεθνώς αναγνωρισμένη διαπίστευση που λαμβάνεται από φορείς διαπίστευσης που συμμετείχαν στις συμφωνίες πολυμερούς αναγνώρισης IAF και ILAC, σύμφωνα με το ISO/IEC 17025 για εργαστηριακές δοκιμές, το ISO/IEC 17020 για την επιθεώρηση και την επιτήρηση και το ISO/IEC 17021-1 και το σύστημα πιστοποίησης προϊόντων ISO/IEC. Αυτή η αλυσίδα διασφαλίζει ότι οι εκθέσεις και τα πιστοποιητικά που εκδίδονται γίνονται αποδεκτά παγκοσμίως.

Το εάν αυτή η δοκιμή μπορεί να προσφερθεί εντός αναγνωρισμένου πεδίου εξαρτάται από το προϊόν σας και το πρότυπο που εφαρμόζεται. Δεδομένου ότι η διαπίστευση βασίζεται στη μέθοδο, το πεδίο εφαρμογής επιβεβαιώνεται γραπτώς στο στάδιο της προσφοράς.

Πεδίο εφαρμογής και εξουσιοδοτήσεις

Σχετικοί Κανονισμοί

Μονογραφίες European Pharmacopoeia και USP
ΕΕ 1333/2008 (πρόσθετα τροφίμων)
ΕΕ 1223/2009 Κανονισμός Καλλυντικών
ICH Q3A / Q3B (ακαθαρσίες)

Σελίδες όπου χρησιμοποιείται αυτή η μέθοδος

Αναλυτικές μέθοδοι — Τι κάνει αυτή η ομάδα μεθόδων;

Η παρακάτω ενότητα περιγράφει τον τομέα στον οποίο ανήκει η δοκιμή HPLC — ανάλυση· οι συνθήκες και τα κριτήρια αποδοχής αυτής της συγκεκριμένης δοκιμής δίνονται στις παραπάνω ενότητες. Το πεδίο εφαρμογής που αφορά το προϊόν σας επιβεβαιώνεται εγγράφως στο στάδιο της προσφοράς.

Οι σελίδες αναλυτικών μεθόδων είναι σελίδες για μια ΤΕΧΝΙΚΗ ΜΕΤΡΗΣΗΣ παρά για μια δοκιμή. Αυτή η διαφορά έχει σημασία: η «δοκιμή αλατονέφωσης» είναι δοκιμή και απαντά σε μία ερώτηση· το «ICP-MS» είναι τεχνική και χρησιμοποιείται σε δεκάδες διαφορετικές δοκιμές. Μερικές φορές ο χρήστης δεν αναζητά τη δοκιμή αλλά την τεχνική — επειδή το όνομα της μεθόδου είναι αυτό που εμφανίζεται στην προδιαγραφή του.

Αυτή η διάκριση γίνεται καθοριστική στην επιλογή εργαστηρίου. Όταν ένας πελάτης ζητά «ανάλυση βαρέων μετάλλων», το πραγματικό ερώτημα είναι με ποια τεχνική θα γίνει: το XRF είναι γρήγορο και μη καταστροφικό αλλά δεν διακρίνει ενώσεις· το AAS είναι οικονομικό για ένα μόνο στοιχείο· το ICP-OES ανιχνεύει πολλαπλά στοιχεία· το ICP-MS βλέπει επίπεδα ιχνών. Το ίδιο δείγμα δίνει αποτελέσματα με διαφορετικά όρια ανίχνευσης και διαφορετικές αβεβαιότητες στις τέσσερις τεχνικές.

Η επιλογή μεθόδου γίνεται με βάση τρία κριτήρια. ΟΡΙΟ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ: βρίσκεται η αναζητούμενη συγκέντρωση εντός του εύρους που μπορεί να δει η μέθοδος; ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ: είναι το υπόστρωμα του δείγματος (πλαστικό, τρόφιμο, έδαφος, μέταλλο) κάτι που μπορεί να χειριστεί η μέθοδος, και απαιτείται προεπεξεργασία; ΣΥΝΔΕΣΗ ΜΕ ΠΡΟΔΙΑΓΡΑΦΗ: επιβάλλει το πρότυπο προϊόντος ή η νομοθεσία συγκεκριμένη μέθοδο; Το τρίτο συχνά υπερισχύει των δύο πρώτων — η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο.

Οι σελίδες μεθόδων δημιουργούν μια ΑΛΥΣΙΔΑ. Μια τεχνική συνδέεται με τις δοκιμαστικές σελίδες όπου χρησιμοποιείται, με τα πρότυπα στα οποία βασίζονται αυτές τις δοκιμές, με τη νομοθεσία με τα οποία συνδέονται αυτά τα πρότυπα και, τελικά, με τα καθεστώτα πρόσβασης στην αγορά. Το παράδειγμα αλυσίδας στο έγγραφο προέλευσης λειτουργεί ως εξής: XRF → ανάλυση μετάλλων → Συμμόρφωση με RoHS → περιορισμός βαρέων μετάλλων → σελίδες επικάλυψης. Από όποιο σύνδεσμο και αν εισέλθει ο χρήστης, φτάνει στους άλλους.

Η προετοιμασία του δείγματος είναι το αόρατο μισό του αποτελέσματος σε αυτήν την οικογένεια και είναι μεγαλύτερη πηγή λάθους από την ίδια την τεχνική. Η μέθοδος πέψης, ο βαθμός λείανσης, ο διαλύτης εκχύλισης και η αναλογία αραίωσης αλλάζουν σημαντικά το αποτέλεσμα. Το ίδιο δείγμα στο ίδιο όργανο δίνει διαφορετικό αποτέλεσμα με διαφορετική προετοιμασία. Συνεπώς, ο ορισμός της μεθόδου καλύπτει και την προετοιμασία.

Η βαθμονόμηση και η επαλήθευση είναι το τρίτο καθοριστικό στοιχείο. Ένα όργανο βαθμονομείται με πιστοποιημένο υλικό αναφοράς, η καμπύλη βαθμονόμησης επαληθεύεται περιοδικά και ένα δείγμα ελέγχου εκτελείται σε κάθε παρτίδα. Χωρίς αυτά τα βήματα, ένας αριθμός που παράγεται δεν είναι ανιχνεύσιμος ακόμα κι αν το όργανο λειτουργεί σωστά.

Ομάδες μεθόδων σε αυτόν τον τομέα

Στοιχειακή ανάλυση
ICP-OES, ICP-MS, AAS και XRF. Διαφέρουν ως προς το όριο ανίχνευσης, την ανοχή μήτρας και την χωρητικότητα πολλαπλών στοιχείων.
Χρωματογραφία
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS και χρωματογραφία ιόντων. Διαχωρίζει ένα μείγμα στα συστατικά του και μετρά το καθένα ξεχωριστά.
Φασματοσκοπία
FTIR, Raman, UV-Vis και οπτική εκπομπή. Για ταυτότητα υλικού, αναγνώριση λειτουργικής ομάδας και σύνθεση κράματος.
Θερμική ανάλυση
DSC, TGA, DMA και διαλατομετρία. Θερμοκρασίες μετάβασης, σύνθεση, αποσύνθεση και διαστατική συμπεριφορά.
Μικροσκοπία και απεικόνιση
Οπτική μικροσκοπία, SEM-EDS, ακτινογραφία και τομογραφία. Δομή, ελαττώματα και στοιχειακή κατανομή.
Κλασική (υγρή) χημεία
Τιτλοδότηση, βαρυμετρία και χρωματομετρία. Χρησιμοποιείται ως μέθοδος αναφοράς και για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων οργάνων.

Συχνές συγχύσεις σε αυτόν τον τομέα

Το XRF είναι ένα εργαλείο διαλογής. βλέπει στοιχεία και δεν διακρίνει ενώσεις. Μια απόφαση για μια περιορισμένη ένωση απαιτεί επιβεβαίωση με υγρή χημεία.
Η φράση «δεν ανιχνεύθηκε» δεν αποτελεί απόδειξη απουσίας· διαβάζεται μαζί με το όριο ανίχνευσης της μεθόδου.
Η προδιαγραφή δεσμεύει τη μέθοδο. Μια τεχνικά καλύτερη μέθοδος δεν γίνεται αποδεκτή εάν η προδιαγραφή απαιτεί άλλη.
Η προετοιμασία του δείγματος είναι μέρος του αποτελέσματος. μια αναφορά που δεν αναφέρει την προετοιμασία δεν μπορεί να αναπαραχθεί.
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με διαφορετικές τεχνικές δεν μπορούν να συγκριθούν άμεσα. Τα όρια ανίχνευσης και οι αβεβαιότητες διαφέρουν.
Μια σελίδα μεθόδου δεν είναι δοκιμαστική σελίδα. ποια μέθοδος εφαρμόζεται σε ποια δοκιμή προέρχεται από το πρότυπο προϊόντος.

Ποιες αποφάσεις υποστηρίζουν αυτά τα αποτελέσματα

Αντιστοίχιση της μεθόδου της προδιαγραφής με το πεδίο του εργαστηρίου
Επιλογή μεθόδου βάσει ορίου ανίχνευσης και συμβατότητας μήτρας
Επιβεβαίωση οργανικού αποτελέσματος με μέθοδο αναφοράς
Εξάλειψη αποκλίσεων που προκύπτουν από την προετοιμασία δείγματος

Σχετικά τεστ

Συχνές ερωτήσεις για τη HPLC — ανάλυση

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ HPLC και UPLC;

Η βασική αρχή είναι η ίδια. Το UPLC λειτουργεί με συσκευασία μικρότερων σωματιδίων και υψηλότερη πίεση. ο διαχωρισμός ολοκληρώνεται πιο γρήγορα με πιο έντονες κορυφές. Η μεταφορά είναι δυνατή εάν η μέθοδος της φαρμακοποιίας επιτρέπει την αλλαγή στήλης.

Γιατί είναι υποχρεωτική η δοκιμή καταλληλότητας συστήματος;

Δείχνει ότι το χρωματογραφικό σύστημα, εκείνη την ημέρα με αυτήν τη στήλη, μπορεί να επιτύχει τον αναμενόμενο διαχωρισμό. Ένα αποτέλεσμα που προκύπτει χωρίς να πληρούνται τα κριτήρια δεν γίνεται δεκτό ως έγκυρο.