Method Validation

Was ist Method Validation?

Bei der Validierung analytischer Methoden handelt es sich um den experimentellen Nachweis, dass eine Methode für den vorgesehenen Verwendungszweck geeignet ist. ICH Q2(R2) definiert die zu bewertenden Leistungsmerkmale: Spezifität, Linearität und Bereich, Genauigkeit, Präzision (Wiederholbarkeit und Zwischenpräzision), Nachweis- und Quantifizierungsgrenzen und Robustheit.

Zweck von Method Validation

Der Zweck besteht darin, nachzuweisen, dass die erzeugten Analysedaten zuverlässig sind. Ein Ergebnis, das mit einer nicht validierten Methode erzielt wurde, wird im Zulassungsdossier oder im Rahmen der GMP nicht akzeptiert.

Bei welchen Produkten wird Method Validation angewendet?

Analyse- und Verunreinigungsmethoden
Auflösungstestmethoden
Methoden zur Reinigungsüberprüfung
Mikrobiologische Methoden
Bioanalytische Methoden

In welchen Branchen wird Method Validation eingesetzt?

ArzneimittelBiotechnologieBiotechnologieMedizinisches Gerät

Normen zu Method Validation

ICH Q2(R2) (Validierung analytischer Verfahren)
ICH Q14 (Entwicklung analytischer Verfahren)
Ph. Eur. 5.21 (chemometrische Methoden) und relevante allgemeine Kapitel
USP <1225> (Validierung kompendialer Verfahren)
USP <1226> (Überprüfung kompendialer Verfahren)

Prüfbedingungen für Method Validation

Methodentyp: Identitäts-, Assay-, Grenztest auf Verunreinigungen oder quantitative Prüfung auf Verunreinigungen; die erforderlichen Parameter variieren entsprechend
Akzeptanzkriterien: Im Validierungsprotokoll vordefiniert
Erzwungene Degradierung: Erforderlich für stabilitätsanzeigende Methoden als Nachweis der Spezifität

Prüfgerät für Method Validation

HPLC-/UPLC-/GC-Systeme
Spektralphotometer
Referenzstandards und Verunreinigungsstandards
Statistische Auswertungssoftware

Probenanforderungen für Method Validation

Wirkstoff-, Produkt- und Placeboproben
Bekannte Verunreinigungsstandards
Exemplare mit erzwungenem Abbau
Der Methodenentwurf und die Beschreibung des Verwendungszwecks müssen bereitgestellt werden

Dauer von Method Validation

Eine vollständige Validierungsstudie dauert aufgrund der Anzahl der Parameter und Replikationsanforderungen Wochen. Die Überprüfung einer kompendialen Methode ist kürzer.

Ablauf von Method Validation

1Der Verwendungszweck und die Art der Methode werden definiert.
2Das Validierungsprotokoll und die Akzeptanzkriterien werden erstellt.
3Es wird eine Spezifitätsstudie durchgeführt; Bei Bedarf wird ein erzwungener Abbau angewendet.
4Die Linearitäts- und Reichweitenstudie wird durchgeführt.
5Es werden Genauigkeits- (Wiederherstellungs-) und Präzisionsstudien durchgeführt.
6Nachweis-/Quantifizierungsgrenzen und Robustheit werden bewertet; Der Bericht ist erstellt.

Annahmekriterien für Method Validation

Akzeptanzkriterien werden VOR der Studie im Validierungsprotokoll definiert und entsprechend dem Verwendungszweck der Methode festgelegt. ICH Q2(R2) definiert, welche Parameter zu bewerten sind; Die Organisation legt die zahlenmäßigen Akzeptanzschwellen mit einer eigenen Begründung fest.

Auswertung der Ergebnisse

Die Validierung zeigt, dass die Methode für die definierte Verwendung geeignet ist, nicht, dass sie unter allen Bedingungen funktioniert. Eine Neubewertung ist erforderlich, wenn die Methode in einer anderen Matrix oder einem anderen Konzentrationsbereich verwendet werden soll. Bei Arzneibuchmethoden kann anstelle einer vollständigen Validierung eine Verifizierung ausreichend sein.

Prüfbericht zu Method Validation

Methodenbeschreibung und Verwendungszweck
Validierungsprotokoll und Akzeptanzkriterien
Rohdaten und statistische Auswertung für jeden Parameter
Vergleich der Ergebnisse mit den Kriterien
Fazit und Gültigkeitsbereich der Methode

Akkreditierung

EUROLAB verfügt über eine international anerkannte Akkreditierung, die von Akkreditierungsstellen erhalten wurde, die Vertragspartei der multilateralen Anerkennungsvereinbarungen IAF und ILAC sind, gemäß ISO/IEC 17025 für Labortests, ISO/IEC 17020 für Inspektion und Überwachung sowie ISO/IEC 17021-1 und ISO/IEC 17065 für System- und Produktzertifizierung. Diese Kette stellt sicher, dass die ausgestellten Berichte und Zertifikate weltweit akzeptiert werden.

Ob dieser Test im akkreditierten Rahmen angeboten werden kann, hängt von Ihrem Produkt und der angewandten Norm ab; Da die Akkreditierung methodenbasiert erfolgt, wird der Umfang bereits im Angebotsstadium schriftlich bestätigt.

Geltungsbereich und Berechtigungen

Pharmazeutische Analyse — Was umfasst dieser Prüfbereich?

Der folgende Abschnitt beschreibt das Gebiet, zu dem der Test Method Validation gehört; die Bedingungen und Abnahmekriterien dieses konkreten Tests stehen in den obigen Abschnitten. Der für Ihr Produkt spezifische Umfang wird schriftlich im Angebotsstadium festgelegt.

Die pharmazeutische Analyse dient der Bestimmung der Identität, Reinheit, Menge und des Verhaltens des Wirkstoffs und des Fertigarzneimittels. Das Besondere an diesem Bereich ist, dass die Methoden weitgehend in den PHARMAKOPÖEN definiert sind: Sowohl die Europäische Pharmakopöe (Ph. Eur.) als auch die Pharmakopöe der Vereinigten Staaten (USP) legen sowohl die Methode als auch den Rahmen für die Anerkennung fest.

Die Verbindlichkeit der Pharmakopöe-Methode bestimmt die Arbeitsweise in diesem Bereich. Während in anderen Branchen das Labor eine geeignete Methode auswählen kann, ist hier die in der Monografie beschriebene Methode maßgebend; soll eine alternative Methode verwendet werden, muss deren Gleichwertigkeit nachgewiesen werden. Dies gewährleistet, dass die Ergebnisse weltweit vergleichbar sind.

Die Analysen werden in mehreren Gruppen durchgeführt. Die Identifizierung und Quantifizierung (HPLC, UV, Titration) zeigen, um welches Produkt es sich handelt und wie viel Wirkstoff es enthält. Das Verunreinigungsprofil und die Untersuchung auf Lösungsmittelrückstände dienen der Erkennung unerwünschter Verbindungen, die aus dem Herstellungsprozess stammen. Elementverunreinigungen beziehen sich auf Metalle, die aus Katalysatoren und Anlagen stammen. Das Auflösungs- und Verteilungsverhalten ist der wichtigste In-vitro-Indikator für das Freisetzungsverhalten des Arzneimittels im Körper.

Der Auflösungsversuch ist eine der wichtigsten Messungen in diesem Bereich. Es reicht nicht aus, dass eine Tablette die richtige Menge an Wirkstoff enthält; dieser Wirkstoff muss sich auch mit der richtigen Geschwindigkeit auflösen. Das Auflösungsprofil wird zur Bewertung der Auswirkungen von Änderungen an der Formulierung auf die Bioverfügbarkeit herangezogen und spielt bei der Zulassung von Generika eine zentrale Rolle.

Die VALIDIERUNG DER METHODE ist in dieser Produktfamilie ein obligatorischer Schritt. Wird eine Pharmakopöe-Methode verwendet, wird überprüft, ob die Methode unter den Bedingungen des jeweiligen Labors ordnungsgemäß funktioniert. Wurde eine eigene Methode entwickelt, wird diese anhand von Parametern wie Linearität, Präzision, Richtigkeit, Selektivität, Nachweis- und Bestimmungsgrenze sowie Robustheit validiert. Ergebnisse, die mit einer nicht validierten Methode erzielt wurden, dürfen nicht in den Zulassungsunterlagen verwendet werden.

Stabilitätsuntersuchungen bestimmen die Haltbarkeitsdauer und sind der zeitaufwändigste Arbeitsschritt in diesem Bereich. Das Produkt wird unter den für das jeweilige Produkt festgelegten Temperatur- und Feuchtigkeitsbedingungen gelagert, in bestimmten Abständen analysiert, und die Ergebnisse dienen als Grundlage für die Angabe der Haltbarkeitsdauer und der Lagerbedingungen. Beschleunigte Tests liefern zwar erste Anhaltspunkte, doch entscheidend sind die Echtzeitdaten.

Der mikrobiologische Bereich ist ein eigenständiger Teilbereich: Bestimmung der Keimzahl, Nachweis bestimmter Mikroorganismen, Sterilitätsprüfung bei sterilen Produkten und Prüfung auf bakterielle Endotoxine. Bei sterilen Produkten kommen zudem die Überprüfung der Verpackungsintegrität und die Sterilisationsvalidierung hinzu.

Die Datenintegrität ist in den letzten Jahren in den Mittelpunkt der Inspektionen gerückt. Es genügt nicht, dass das Ergebnis korrekt ist; die Rohdaten müssen rückverfolgbar, unveränderbar und prüfbar sein. Die Validierung elektronischer Aufzeichnungssysteme ist daher zu einem untrennbaren Teil der Analyse geworden.

Methodengruppen in diesem Bereich

Identität und Gehalt
HPLC, UPLC, UV-Vis-Spektrophotometrie, Titration, Identitätsbestätigung mittels FTIR.
Verunreinigungen und Rückstände
Verwandte Verunreinigungen, Abbauprodukte, Restlösungsmittel (GC-Headspace), Nitrosamin-Screening.
Elementverunreinigungen
Bestimmung von Elementverunreinigungen mittels ICP-MS und ICP-OES sowie zugehörige Risikobewertung.
Physikalisch-chemisch
Freisetzung und Zerfall, Härte, Abrieb, Gleichförmigkeit der Dosiereinheiten, Wassergehalt (Karl Fischer), Partikelgröße.
Mikrobiologisch
Mikrobielle Keimzahlbestimmung, spezifizierte Mikroorganismen, Sterilität, bakterielles Endotoxin, Konservierungsmittelwirksamkeit.
Stabilität
Echtzeit- und beschleunigte Stabilitätsstudien; Photostabilität und Stabilität während der Anwendung.

Häufig verwechselt in diesem Bereich

Die Arzneibuchmethode ist bindend; eine alternative Methode darf nur durch Nachweis ihrer Gleichwertigkeit verwendet werden.
Ein ohne Methodenvalidierung erzeugtes Ergebnis darf nicht in einem Zulassungsdossier verwendet werden.
Die beschleunigte Stabilität ersetzt nicht die Echtzeitdaten; die Haltbarkeit wird durch Echtzeitergebnisse gestützt.
Das Freisetzungsprofil ist empfindlich gegenüber Apparatetyp, Rührgeschwindigkeit und Medium; die Bedingungen müssen im Bericht vollständig sein.
Ein Mangel an Datenintegrität führt bei einer Inspektion zu einer Nichtkonformität, selbst wenn das Ergebnis korrekt ist.
Eine Änderung der Formulierung oder des Lieferanten erfordert einen analytischen Vergleich und, falls erforderlich, eine neue Stabilitätsstudie.

Welche Entscheidungen diese Ergebnisse unterstützen

Zulassungsdossier und Chargenfreigabe
Bestimmung von Haltbarkeit und Lagerbedingungen
Methodentransfer und Methodenvalidierung
Wareneingangskontrolle von Rohstoffen der Lieferanten
Bewertung der Auswirkung einer Formulierungsänderung auf die Bioäquivalenz

Häufige Fragen zu Method Validation

Ist für eine Arzneibuchmethode eine Validierung erforderlich?

Eine vollständige Validierung ist normalerweise nicht erforderlich, eine Verifizierung jedoch: Es muss gezeigt werden, dass die Methode mit Ihrer Probe in Ihrem Labor funktioniert. USP <1226> definiert diesen Ansatz.

Wenn wir die Methode ändern, ist eine erneute Validierung obligatorisch?

Es kommt auf den Umfang der Änderung an. Bei geringfügigen Änderungen kann eine Neubewertung der betroffenen Parameter ausreichend sein; Eine Änderung, die das Trennungsprinzip ändert, erfordert eine vollständige Validierung.