Endotoxin是什麼？
內毒素測試測量源自革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多醣（內毒素）的量。內毒素具有耐熱性：滅菌可殺死細菌，但不會破壞內毒素。因此，無菌產品仍可能產生熱原，必須單獨進行測試。
Endotoxin的目的
目的是顯示透過血流、腦脊髓液或植入接觸身體的裝置中的內毒素水平低於允許的限度。
Endotoxin適用於哪些產品？
- 靜脈導管和輸液器
- 植入物
- 透析裝置
- 手術器械和套件
- 與腦脊髓液接觸的裝置
Endotoxin應用於哪些行業？
與Endotoxin相關的標準
- EP 2.6.14
- 美國藥典<85>
- ANSI/AAMI ST72
- ISO 11737-3
Endotoxin的測試條件
- 方法
- 凝膠凝塊法、比濁法或鱟試劑顯色法
- 萃取
- 本產品的身體接觸表面是用無內毒素的水提取的
- 幹擾控制
- 必須驗證該產品不會抑製或增強測試
Endotoxin的測試設備
- 鱟試劑盒和試劑
- 無內毒素玻璃器皿
- 酶標儀（用於動力學方法）
- 乾熱烘箱（用於去熱原）
- 溫控培養箱
Endotoxin的樣品要求
- 最終的滅菌產品
- 必須知道身體接觸表面積
- 標本數量根據藥典和批次資訊決定
- 標本必須在無內毒素的容器中製備和運輸
Endotoxin的測試時程
初步測試，包括幹擾（抑制/增強）研究，需要幾天；常規測試時間較短。
Endotoxin的測試程序
- 1計算產品的內毒素限量。
- 2進行幹擾研究，或參考現有研究。
- 3產品用無內毒素水萃取。
- 4將萃取物與鱟試劑混合。
- 5它在規定的溫度下孵育。
- 6根據方法測量凝塊形成、濁度或顯色。
- 7從標準曲線計算內毒素量。
Endotoxin的允收準則
驗收標準是針對產品計算的內毒素限量。此限值是根據設備的暴露途徑和患者體重，使用藥典中定義的公式計算得出的；對於與腦脊髓液接觸的設備，該限值明顯較低。
結果評估
將結果與計算的限值進行比較。如果幹擾研究無效，則無法解釋結果；如果產品抑制 LAL 反應，則必須確定稀釋因子。
Endotoxin測試報告
- 應用藥典和方法
- 樣品描述、批次和表面積
- 計算內毒素限量
- 幹擾研究結果和稀釋因子
- 測得的內毒素值（EU/設備或EU/mL）
- 與極限比較
認證
EUROLAB 擁有 IAF 和 ILAC 多邊認可安排締約方認證機構獲得的國際認可認證，根據 ISO/IEC 17025 實驗室測試、ISO/IEC 17020 檢查和監督以及 ISO/IEC 17021-1 和 ISO/IEC 17065 系統和產品認證。該鏈條確保所發布的報告和證書在全球範圍內得到接受。
是否可以在認可範圍內提供此測試取決於您的產品和所採用的標準；由於認證是基於方法的，因此範圍在報價階段以書面形式確認。
範圍和授權相關規定
- MDR（歐盟）2017/745
- 藥典要求
藥物分析 — 此測試領域涵蓋哪些內容？
以下段落說明 Endotoxin 測試所屬的領域；此測試本身的條件與允收標準列於上方各節。您產品專屬的範圍將在報價階段以書面確認。
药学分析用以确定药品活性成分及成品的成分、纯度、含量及其特性。此领域与其他领域的区别在于,相关方法大多载於药典中:《欧洲药典》(Ph. Eur.)与《美国药典》(USP)均同时提供分析方法及接受标准。
药典方法的约束力决定了该领域的工作模式。虽然其他产业的实验室可以选择合适的方法,但在此领域中,专论中所载明的方法才是依归;若要采用替代方法,则必须证明其等效性。这确保了结果在全球范围内具有可比性。
分析工作分为几个组别进行。鉴别与含量测定(HPLC、UV、滴定)可显示产品的成分及其所含有效成分的量。杂质图谱与残留溶剂分析,旨在检测生产过程中产生的非预期化合物。元素杂质分析,针对源自催化剂及设备的金属进行处理。溶解与分散行为,是反映药物在体内释放行为最重要的体外指标。
溶解度试验是该领域中最关键的测量项目之一。一片药锭仅含有正确剂量的有效成分是不够的;该成分还必须以适当的速率溶解。溶解曲线可用於评估配方变更对生体可用率的影响,并在通用药品的许可审查中占据核心地位。
方法验证是此系列中不可或缺的一环。若采用药典方法,则须确认该方法在该实验室的条件下能正常运作。若开发自有方法,则须依据线性度、精密度、准确度、选择性、检测限与定量限、稳健性等参数进行验证。以未经验证的方法所产生的结果,不得用於许可申请文件中。
稳定性研究决定产品保质期,也是该领域中耗时最长的作业。产品会在指定的温度和湿度条件下静置,并於特定间隔进行分析,其结果将作为保质期及储存条件声明的依据。加速条件可提供初步资讯,但即时数据才是关键所在。
微生物学方面则是一项独立的环节:包括微生物总数计数、特定微生物的检测、无菌产品的无菌试验,以及细菌内毒素试验。针对无菌产品,还须进行包装完整性检测与灭菌验证。
数据完整性近年来已成为检查的核心。结果正确还不够;原始数据必须可追溯、不可篡改且可审计。因此,电子记录系统的验证已成为分析工作不可分割的一部分。
此領域的方法群組
鉴别与含量测定
HPLC、UPLC、紫外-可见分光光度法、滴定法,FTIR鉴别确认。
杂质与残留物
相关杂质、降解产物、残留溶剂(顶空GC)、亚硝胺筛查。
元素杂质
通过ICP-MS及ICP-OES测定元素杂质并进行相应风险评估。
理化
溶出与崩解、硬度、脆碎度、剂量单位均匀度、水分含量(卡尔费休法)、粒度。
微生物学
微生物计数、特定微生物、无菌检查、细菌内毒素、防腐剂效力。
稳定性
实时及加速稳定性研究;光稳定性及使用中稳定性。
此領域常見混淆之處
- 药典方法具有约束力;替代方法只有在证明其等效性后方可使用。
- 未经方法验证得出的结果不能用于注册申报档案。
- 加速稳定性不能替代实时数据;保质期须以实时结果为支撑。
- 溶出曲线对仪器类型、搅拌速度及介质敏感;报告中须完整记录相关条件。
- 即使结果正确,数据完整性方面的缺陷仍会在检查中导致不合规。
- 配方或供应商变更须进行分析比对,必要时须开展新的稳定性研究。
這些結果支持哪些決策
- 注册档案及批次放行
- 确定保质期及储存条件
- 方法转移及方法验证
- 供应商来料原料验收控制
- 评估配方变更对生物等效性的影响
相關測試
關於Endotoxin的常見問題
我的產品是無菌的－為什麼需要進行內毒素測試？
內毒素具有耐熱性；儘管滅菌可以殺死細菌，但它不會分解細胞壁殘留物內毒素。因此，無菌產品仍然會引起熱原反應，並且必須單獨測量內毒素。
內毒素限量是如何決定的？
它是根據設備的接觸途徑和允許劑量，使用藥典中定義的公式計算得出的。對於與腦脊髓液接觸的設備，該限值要低得多；計算結果必須顯示在報告中。