HPLC 分析是什麼？
高效液相層析法是基於使樣品在壓力下用液體流動相通過填充柱。根據組分對固定相的親和力，組分以不同的速度移動，並在不同的時間離開色譜柱；它們透過 UV、DAD、螢光或折射率檢測器進行測量。
HPLC 分析的目的
目的是分離熱不穩定或非揮發性化合物而不降解它們並確定它們的數量。藥物中的活性成分測定和雜質分析以及食品中的添加劑和維生素測定都是透過該技術完成的。
HPLC 分析適用於哪些產品？
- 藥物活性成分及成品
- 食品添加物、防腐劑和甜味劑
- 維生素製劑和補充劑
- 化妝品中的防腐劑和紫外線過濾劑
- 聚合物添加劑和抗氧化劑
HPLC 分析應用於哪些行業？
與HPLC 分析相關的標準
- 歐洲藥典 (Ph. Eur.) 通則 2.2.29 — 液相層析
- USP <621>（色譜法）
- ICH Q2(R2)（分析程序驗證）
- EN 12856 / EN 12857（食品中甜味劑和添加劑的測定）
HPLC 分析的測試條件
- Kolon
- 方法標準中定義的填充和尺寸
- Hareketli faz
- 方法中定義的緩衝液/有機溶劑比例；等度或梯度
- 偵測器波長
- 方法中根據分析物的吸收最大值來規定
- 系統適用性
- 藥典中定義的溶解度、拖尾與重現標準
HPLC 分析的測試設備
- 高壓幫浦和梯度裝置
- 自動進樣器
- 柱溫箱和分析柱
- UV/DAD/螢光/RI檢測器
- 色譜數據系統
HPLC 分析的樣品要求
- 樣品必須可溶於流動相
- 需要過濾（通常為 0.45 µm 或以下）以防止色譜柱堵塞
- 研磨和萃取應用於固體劑型
- 樣品數量因配方而異；一般幾克就足夠了
- 活性成分和輔料資訊必須分享
HPLC 分析的測試時程
單次運行一般在 10-60 分鐘之間。透過系統適用性測試、校準和重複注射，常規報告需要幾個工作天。
HPLC 分析的測試程序
- 1將樣品溶解、稀釋並過濾。
- 2準備好校準標準。
- 3執行系統適用性測試，並且在滿足標準之前不會進行分析。
- 4將樣品注入管柱中並記錄色譜圖。
- 5透過保留時間來識別峰。
- 6根據校準曲線評估峰面積。
- 7結果透過品質控製樣品進行驗證。
HPLC 分析的允收準則
有效成分含量和雜質限量來自藥典或註冊檔案；在食品和化妝品中，適用相關的添加劑法規。該方法本身沒有定義限制。
結果評估
結果是根據校準曲線計算的。在方法經過驗證的實驗室中，預先確定線性、回收率、重複性和定量限；報告中的值在此驗證範圍內是有意義的。
HPLC 分析測試報告
- 樣本描述、收受日期和實驗室編號
- 應用的方法和參考標準（如果有）
- 儀器及測量條件
- 樣品製備步驟
- 測量結果和單位
- 測量不確定度（如果需要）
- 結果僅與提交測試的樣品相關的聲明
認證
EUROLAB 擁有 IAF 和 ILAC 多邊認可安排締約方認證機構獲得的國際認可認證，根據 ISO/IEC 17025 實驗室測試、ISO/IEC 17020 檢查和監督以及 ISO/IEC 17021-1 和 ISO/IEC 17065 系統和產品認證。該鏈條確保所發布的報告和證書在全球範圍內得到接受。
是否可以在認可範圍內提供此測試取決於您的產品和所採用的標準；由於認證是基於方法的，因此範圍在報價階段以書面形式確認。
範圍和授權相關規定
- 歐洲藥典和 USP 專論
- EU 1333/2008（食品添加物）
- EU 1223/2009 化妝品法規
- ICH Q3A / Q3B（雜質）
使用該方法的頁面
分析方法 — 该方法组的作用是什么?
以下段落說明 HPLC 分析 測試所屬的領域；此測試本身的條件與允收標準列於上方各節。您產品專屬的範圍將在報價階段以書面確認。
分析方法頁面談的是「量測技術」,而非測試本身。這個區別很重要:「鹽霧測試」是一項測試,回答單一問題;「ICP-MS」則是一種技術,可用於數十種不同的測試中。有時使用者尋找的並非測試本身,而是技術——因為方法名稱正是規格書中所寫的內容。
在選擇實驗室時,這個區別變得至關重要。當客戶要求「重金屬分析」時,真正的問題在於將採用哪種技術:XRF快速且非破壞性,但無法區分化合物;AAS對單一元素而言經濟實惠;ICP-OES可篩檢多種元素;ICP-MS能偵測痕量濃度。同一樣品在這四種技術下,會得出偵測極限與不確定度各不相同的結果。
方法選擇依三項準則進行。偵測極限:所欲偵測的濃度是否落在該方法可偵測的範圍內?基質相容性:樣品基質(塑膠、食品、土壤、金屬)是否為該方法可處理的類型,是否需要前處理?規格關聯性:產品標準或法規是否規定特定方法?第三項準則往往凌駕前兩者——規格書會限定所須採用的方法。
方法頁面建構了一條鏈。一項技術與其使用的測試頁面、這些測試所依據的標準、這些標準所依賴的立法以及最終的市場准入制度相關聯。來源文件中的範例鏈的工作方式如下：XRF → 金屬分析 → RoHS 合規性 → 重金屬限制 → 塗層頁面。無論用戶從哪個連結進入，他們都會到達其他連結。
樣品製備是該系列結果中看不見的一半，並且是比技術本身更大的錯誤來源。消解方法、研磨程度、萃取溶劑和稀釋比例顯著改變結果。同一樣品在同一台儀器上，不同的製備方法得到不同的結果；因此，此方法的定義也涵蓋了準備工作。
校準和驗證是第三個決定因素。使用經過認證的參考材料對儀器進行校準，定期驗證校準曲線，並在每批中運行對照樣本。如果沒有這些步驟，即使儀器運作正常，產生的數字也無法追蹤。
此領域的方法群組
元素分析
ICP-OES、ICP-MS、AAS 和 XRF。它們在檢測極限、基質耐受性和多元素容量方面有所不同。
色谱法
GC、GC-MS、HPLC、LC-MS/MS 和離子色譜。它將混合物分離成不同的成分並分別進行測量。
光谱法
FTIR、拉曼、紫外-可見光和光學發射。用於材料識別、官能基識別和合金成分。
熱分析
DSC、TGA、DMA 和膨脹測定法。轉變溫度、成分、分解和尺寸行為。
显微与成像
光學顯微鏡、SEM-EDS、射線照相和斷層掃描。結構、缺陷和元素分佈。
经典(湿法)化学
滴定、重量分析和比色分析。用作參考方法和確認儀器結果。
此領域常見混淆之處
- XRF是一種篩選工具；它只能看到元素，但不能區分化合物。對限制化合物的決定需要透過濕化學進行確認。
- 「未檢出」一詞並非不存在的證明;須與該方法的偵測極限一併解讀。
- 規範綁定了方法。如果規範需要另一種方法，則不會接受技術上更好的方法。
- 樣品製備是結果的一部分；未說明製備過程的報告是不可重複的。
- 不同技術所獲得的結果不能直接比較；它們的檢測極限和不確定性不同。
- 方法頁不是測試頁；哪一種方法適用哪一種測試來自產品標準。
這些結果支持哪些決策
- 将规范中所写方法与实验室范围相匹配
- 依偵測極限與基質相容性選擇方法
- 以參考方法確認儀器分析結果
- 消除因樣品製備而產生的偏差
相關測試
關於HPLC 分析的常見問題
HPLC 和 UPLC 有什麼差別？
基本原理是一樣的。 UPLC 在較小顆粒填充和較高壓力下運行；分離完成得更快，峰值更尖銳。如果藥典方法允許更換色譜柱，則可以進行轉移。
為什麼必須進行系統適用性測試？
顯示當天使用此色譜管的色譜系統可以達到預期的分離效果。不符合標準而獲得的結果不被視為有效。