Che cos'è Assay?
Il dosaggio misura la quantità di principio attivo nel prodotto. L'HPLC è il metodo più comune; secondo la monografia possono essere utilizzati anche metodi titrimetrici o spettrofotometrici. Il risultato è espresso in percentuale del contenuto dichiarato.
Scopo di Assay
Lo scopo è verificare che il prodotto contenga la dose dichiarata. La deviazione della dose crea un rischio diretto sia per l’efficacia che per la sicurezza.
A quali prodotti si applica Assay?
- Compresse, capsule e confetti
- Sciroppi, sospensioni e gocce
- Soluzioni iniettabili
- Creme, gel e unguenti
- Principi attivi farmaceutici
In quali settori si utilizza Assay?
Norme relative a Assay
- Ph.Eur. 2.2.29 (cromatografia liquida)
- Ph.Eur. 2.2.46 (tecniche di separazione cromatografica)
- USP <621> (cromatografia)
- ICH Q2(R2) (convalida delle procedure analitiche)
- Monografie di prodotto rilevanti
Condizioni di Assay
- Idoneità del sistema
- I criteri di idoneità del sistema indicati nella monografia devono essere soddisfatti in ogni analisi
- Norma di riferimento
- Farmacopea o standard operativo qualificato
- Preparazione del campione
- Estrazione e diluizione definite nella monografia
Apparecchiatura per Assay
- HPLC / UPLC (con DAD o rilevatore UV)
- Titolatore automatico
- Spettrofotometro UV/Vis
- Bilancia analitica (0,00001 g)
- Bagno ad ultrasuoni e centrifuga
Requisiti del campione per Assay
- Il numero di unità specificate nella monografia (compressa, capsula, ecc.)
- È necessario fornire il numero di lotto e la dose dichiarata
- L'esemplare dovrà essere inviato nella sua confezione originale
- Devono essere fornite informazioni sulla norma di riferimento
Durata di Assay
L'analisi cromatografica, insieme alla preparazione del campione e alla verifica dell'idoneità del sistema, richiede diversi giorni lavorativi.
Procedura di Assay
- 1Vengono stabiliti il metodo e le condizioni nella monografia.
- 2Viene preparata la soluzione standard di riferimento.
- 3Viene eseguita una corsa di idoneità del sistema e i criteri vengono verificati.
- 4Il campione è preparato secondo la monografia.
- 5Viene eseguita la misurazione cromatografica o titrimetrica.
- 6Il contenuto di sostanza attiva è calcolato come percentuale del valore dichiarato.
Criteri di accettazione di Assay
Il criterio di accettazione non è riportato in questa pagina: per ogni principio attivo e ogni prodotto il limite deriva dalla relativa monografia della farmacopea o dalla specifica approvata nel dossier di autorizzazione all'immissione in commercio. Il capitolo generale della farmacopea definisce il metodo; la monografia pone il limite.
Valutazione dei risultati
Un risultato ottenuto senza soddisfare i criteri di idoneità del sistema non è valido; questi criteri dimostrano che il metodo ha funzionato correttamente quel giorno. Anche il solo risultato del test non è sufficiente: l'uniformità del contenuto e i test di dissoluzione mostrano che ogni unità del prodotto eroga la dose corretta.
Rapporto di Assay
- Identificazione del campione, lotto e dose dichiarata
- Monografia e condizioni del metodo applicate
- Risultati di idoneità del sistema
- Risultato del test (% del dichiarato)
- Cromatogrammi e calcoli
Accreditamento
EUROLAB detiene un accreditamento riconosciuto a livello internazionale ottenuto da organismi di accreditamento parte degli accordi di riconoscimento multilaterale IAF e ILAC, secondo ISO / IEC 17025 per prove di laboratorio, ISO / IEC 17020 per ispezione e sorveglianza e ISO / IEC 17021-1 e ISO / IEC 17065 per certificazione di sistema e prodotto. Questa catena garantisce che i rapporti e i certificati emessi siano accettati in tutto il mondo.
Se questo test può essere offerto nell'ambito accreditato dipende dal prodotto e dallo standard applicato; poiché l'accreditamento è basato sul metodo, l'ambito viene confermato per iscritto in fase di offerta.
Ambito e autorizzazioniRegolamenti correlati
- Direttiva 2001/83/CE sui medicinali per uso umano
- Guida alle GMP (EudraLex Volume 4)
Analisi farmaceutica — Cosa copre questo ambito di prova?
La sezione seguente descrive l'ambito a cui appartiene la prova Assay; le condizioni e i criteri di accettazione di questa prova specifica sono riportati nelle sezioni precedenti. L'ambito specifico del vostro prodotto viene confermato per iscritto in fase di offerta.
L'analisi farmaceutica determina l'identità, la purezza, la quantità e il comportamento del principio attivo del medicinale e del prodotto finito. Ciò che contraddistingue questa disciplina dalle altre è il fatto che i metodi sono in gran parte definiti nelle FARMACOPEE: la Farmacopea Europea (Ph. Eur.) e la Farmacopea degli Stati Uniti (USP) forniscono sia il metodo che il quadro di riferimento per l'accettazione.
Il carattere vincolante del metodo della farmacopea determina le modalità operative del settore. Mentre in altri settori il laboratorio può scegliere un metodo adeguato, in questo caso è fondamentale attenersi al metodo indicato nella monografia; se si intende utilizzare un metodo alternativo, è necessario dimostrarne l'equivalenza. Ciò garantisce che i risultati siano comparabili a livello mondiale.
Le analisi vengono condotte in diversi gruppi. L'identificazione e la determinazione quantitativa (HPLC, UV, titolazione) indicano la natura del prodotto e la quantità di principio attivo in esso contenuta. Il profilo di impurità e i residui di solventi individuano i composti indesiderati derivanti dal processo di produzione. Le impurità elementari riguardano i metalli provenienti dai catalizzatori e dalle attrezzature. Il comportamento di dissoluzione e dispersione costituisce il principale indicatore in vitro relativo al comportamento di rilascio del farmaco nell'organismo.
L'ESPERIMENTO DI DISCIOLUZIONE è una delle misurazioni più critiche in questo campo. Non è sufficiente che una compressa contenga la giusta quantità di principio attivo; tale sostanza deve disciogliersi alla velocità adeguata. Il profilo di dissoluzione viene utilizzato per valutare l'effetto delle modifiche alla formulazione sulla biodisponibilità e riveste un ruolo centrale nell'autorizzazione all'immissione in commercio dei farmaci generici.
La CONVALIDA DEL METODO è una fase obbligatoria in questa famiglia. Se si utilizza un metodo della Farmacopea, si verifica che il metodo funzioni correttamente nelle condizioni specifiche di quel laboratorio. Se è stato sviluppato un metodo proprio, questo viene convalidato in base a parametri quali linearità, precisione, accuratezza, selettività, limiti di rilevabilità e di determinazione, nonché robustezza. I risultati ottenuti con un metodo non convalidato non possono essere utilizzati nel fascicolo di autorizzazione.
I test di stabilità determinano la durata di conservazione e rappresentano l'attività più lunga in questo settore. Il prodotto viene lasciato a riposo in condizioni di temperatura e umidità specificate, viene analizzato a intervalli regolari e i risultati costituiscono la base per la dichiarazione relativa alla durata di conservazione e alle condizioni di conservazione. Le condizioni accelerate forniscono informazioni preliminari, ma i dati in tempo reale sono fondamentali.
L'aspetto microbiologico costituisce un ambito a sé stante: conteggio della carica microbica, ricerca di microrganismi specifici, prova di sterilità sui prodotti sterili e prova delle endotossine batteriche. Per i prodotti sterili entrano in gioco anche la verifica dell'integrità della confezione e la convalida della sterilizzazione.
L'integrità dei dati si è spostata al centro delle ispezioni negli ultimi anni. Non basta che il risultato sia corretto; i dati grezzi devono essere tracciabili, inalterabili e verificabili. La convalida dei sistemi di registrazione elettronica è quindi diventata una parte inseparabile dell'analisi.
Gruppi di metodi in questo ambito
Identità e dosaggio
HPLC, UPLC, spettrofotometria UV-Vis, titolazione, conferma dell'identità mediante FTIR.
Impurezze e residui
Impurezze correlate, prodotti di degradazione, solventi residui (GC-headspace), screening delle nitrosammine.
Impurezze elementari
Determinazione delle impurezze elementari mediante ICP-MS e ICP-OES e relativa valutazione del rischio.
Fisico-chimico
Dissoluzione e disgregazione, durezza, friabilità, uniformità delle unità di dosaggio, contenuto d'acqua (Karl Fischer), dimensione delle particelle.
Microbiologico
Conta microbica, microrganismi specificati, sterilità, endotossina batterica, efficacia del conservante.
Stabilità
Studi di stabilità in tempo reale e accelerata; fotostabilità e stabilità in uso.
Confusioni frequenti in questo ambito
- Il metodo farmacopeico è vincolante; un metodo alternativo può essere usato solo dimostrandone l'equivalenza.
- Un risultato prodotto senza convalida del metodo non può essere utilizzato in un dossier di registrazione.
- La stabilità accelerata non sostituisce i dati in tempo reale; la shelf-life è supportata da risultati in tempo reale.
- Il profilo di dissoluzione è sensibile al tipo di apparecchio, alla velocità di agitazione e al mezzo; le condizioni devono essere complete nel rapporto.
- Una carenza nell'integrità dei dati produce una non conformità in un'ispezione anche se il risultato è corretto.
- Una modifica della formulazione o del fornitore richiede un confronto analitico e, se necessario, un nuovo studio di stabilità.
Quali decisioni supportano questi risultati
- Il dossier di registrazione e il rilascio dei lotti
- Determinazione della shelf-life e delle condizioni di conservazione
- Trasferimento del metodo e convalida del metodo
- Controllo di accettazione delle materie prime in ingresso dai fornitori
- Valutazione dell'effetto di una modifica della formulazione sulla bioequivalenza
Test correlati
Domande frequenti su Assay
Il risultato del test è superato: il prodotto è conforme?
Non da solo. Il dosaggio fornisce il contenuto medio; l'uniformità del contenuto è necessaria separatamente per la distribuzione unità per unità e i test di dissoluzione per prevedere la biodisponibilità.