Analyse LC-MS | EUROLAB

Qu'est-ce que LC-MS — analyse ?

LC-MS est une technique hybride dans laquelle les composants séparés par chromatographie liquide sont transférés vers un spectromètre de masse via une interface (généralement ionisation par électrospray). La chromatographie assure la séparation et la mesure de masse permet l'identification via la masse moléculaire.

Objectif de LC-MS — analyse

L’objectif est à la fois de séparer et d’identifier les composés non volatils, polaires ou thermiquement labiles qui ne peuvent pas être analysés par GC. Les peptides, les protéines, les métabolites des médicaments et les résidus polaires sont étudiés grâce à cette technique.

À quels produits LC-MS — analyse s'applique-t-il ?

Principes actifs pharmaceutiques et leurs métabolites
Niveaux de médicaments dans les échantillons biologiques
Résidus polaires de pesticides et de médicaments vétérinaires dans les aliments
Mycotoxines
Caractérisation des peptides et des protéines

Dans quels secteurs LC-MS — analyse est-il utilisé ?

ChimieMédicamentsAlimentationProduits de beautéEnvironnementBiotechnologieAgriculture

Normes relatives à LC-MS — analyse

ICH Q2(R2) (validation des procédures analytiques)
Pharmacopée européenne 2.2.43 (spectrométrie de masse)
EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
UE 2021/808 (performance des méthodes de résidus de médicaments vétérinaires)

Conditions de LC-MS — analyse

ionisation: L'ESI est courant ; L'APCI est préféré dans les composés non polaires
Polarite: Mode ions positifs ou négatifs, selon l'analyte
Hareketli faz: Tampon volatile requis ; Les sels qui perturbent l'ionisation ne sont pas utilisés
Matris etkisi: La suppression des ions doit être évaluée ; étalonnage matriciel recommandé

Équipement pour LC-MS — analyse

Système HPLC/UPLC
Source d'ions Electrospray ou APCI
Analyseur de masse (simple quadripôle ou haute résolution)
Système de vide et générateur d'azote
Logiciel de traitement de données

Exigences d'échantillon pour LC-MS — analyse

L'échantillon doit être rendu soluble dans un tampon volatil
Doit être exempt de sels et de détergents qui perturbent l'ionisation
La précipitation des protéines ou SPE est appliquée aux échantillons biologiques
L'échantillon doit être envoyé sous la chaîne du froid

Durée de LC-MS — analyse

Une course dure généralement moins de 30 minutes. Si le développement de méthodes et l’évaluation des effets matriciels sont nécessaires, la durée totale s’allonge considérablement.

Procédure de LC-MS — analyse

1L'échantillon est extrait et nettoyé des composants interférents.
2Un standard interne est ajouté.
3La séparation est effectuée sur la colonne LC.
4La sortie de la colonne alimente la source d'ions et les composants sont ionisés.
5Le spectre de masse est enregistré.
6L'identification se fait par accord sur la masse et le temps de rétention.
7La quantification est calculée via l’étalon interne.

Critères d'acceptation de LC-MS — analyse

Une méthode produit un résultat ; il ne fixe pas de limite. La question de savoir si le résultat est acceptable est déterminée par la réglementation ou les spécifications auxquelles le produit est soumis.

Évaluation des résultats

La suppression des ions est la source d’erreur la plus importante en LC-MS ; un étalon interne, et si possible un étalon marqué par un isotope, est donc utilisé. La fiabilité du résultat dépend de la mesure de l'effet matrice lors de la validation de la méthode.

Rapport de LC-MS — analyse

Description de l'échantillon, date de réception et numéro de laboratoire
Méthode appliquée et étalon de référence, le cas échéant
Conditions d’instrument et de mesure
Étapes de préparation des échantillons
Résultats et unités de mesure
Incertitude de mesure (si demandé)
Une déclaration selon laquelle les résultats concernent uniquement l'échantillon soumis pour test

Accréditation

EUROLAB détient une accréditation internationalement reconnue obtenue auprès des organismes d'accréditation parties aux accords de reconnaissance multilatérale de l'IAF et de l'ILAC, selon ISO/IEC 17025 pour les tests en laboratoire, ISO/IEC 17020 pour l'inspection et la surveillance, et ISO/IEC 17021-1 et ISO/IEC 17065 pour la certification des systèmes et des produits. Cette chaîne garantit que les rapports et certificats délivrés sont acceptés dans le monde entier.

La possibilité de proposer ce test dans le cadre d'une accréditation dépend de votre produit et de la norme appliquée ; l'accréditation étant méthodologique, le périmètre est confirmé par écrit au stade du devis.

Portée et autorisations

Règlements connexes

UE 37/2010 (limites de résidus de médicaments vétérinaires)
UE 2023/915 (contaminants dans les aliments)
ICH M10 (validation des méthodes bioanalytiques)

Pages où cette méthode est utilisée

Méthodes d'analyse — Que fait ce groupe de méthodes ?

La section ci-dessous décrit le domaine auquel appartient l'essai LC-MS — analyse ; les conditions et critères d'acceptation de cet essai figurent dans les sections ci-dessus. Le périmètre propre à votre produit est confirmé par écrit au stade du devis.

Les pages sur les méthodes analytiques sont des pages consacrées à une TECHNIQUE DE MESURE plutôt qu'à un essai. Cette différence compte : « l'essai au brouillard salin » est un essai et répond à une question ; « ICP-MS » est une technique et s'utilise dans des dizaines d'essais différents. Parfois, l'utilisateur ne recherche pas l'essai mais la technique — car c'est le nom de la méthode qui figure dans son cahier des charges.

Cette distinction devient déterminante dans le choix d'un laboratoire. Lorsqu'un client demande une « analyse des métaux lourds », la vraie question est de savoir par quelle technique elle sera réalisée : la XRF est rapide et non destructive mais ne distingue pas les composés ; l'AAS est économique pour un seul élément ; l'ICP-OES analyse plusieurs éléments ; l'ICP-MS détecte des niveaux de trace. Le même échantillon donne des résultats avec des limites de détection et des incertitudes différentes selon les quatre techniques.

Le choix de la méthode se fait selon trois critères. LIMITE DE DÉTECTION : la concentration recherchée est-elle dans la plage que la méthode peut détecter ? COMPATIBILITÉ DE MATRICE : la matrice de l'échantillon (plastique, aliment, sol, métal) est-elle une que la méthode peut traiter, et un prétraitement est-il nécessaire ? LIEN AVEC LE CAHIER DES CHARGES : la norme produit ou la législation impose-t-elle une méthode particulière ? Le troisième critère l'emporte souvent sur les deux premiers — le cahier des charges impose la méthode.

Les pages de méthodes construisent une CHAÎNE. Une technique est liée aux pages de test sur lesquelles elle est utilisée, aux normes sur lesquelles reposent ces tests, à la législation à laquelle ces normes sont liées et, en fin de compte, aux régimes d'accès au marché. La chaîne d'exemples dans le document source fonctionne comme ceci : XRF → analyse des métaux → conformité RoHS → restriction sur les métaux lourds → pages de revêtement. Quel que soit le lien à partir duquel l’utilisateur entre, il atteint les autres.

La préparation des échantillons est la moitié invisible du résultat dans cette famille et constitue une source d’erreur plus importante que la technique elle-même. La méthode de digestion, le degré de broyage, le solvant d'extraction et le taux de dilution modifient considérablement le résultat. Le même échantillon sur le même instrument donne un résultat différent avec une préparation différente ; la définition de la méthode couvre donc également la préparation.

L'étalonnage et la vérification sont le troisième élément déterminant. Un instrument est calibré avec un matériau de référence certifié, la courbe d'étalonnage est vérifiée périodiquement et un échantillon de contrôle est analysé dans chaque lot. Sans ces étapes, un numéro produit n'est pas traçable même si l'instrument fonctionne correctement.

Groupes de méthodes dans ce domaine

Analyse élémentaire
ICP-OES, ICP-MS, AAS et XRF. Ils diffèrent par la limite de détection, la tolérance matricielle et la capacité multi-éléments.
Chromatographie
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS et chromatographie ionique. Il sépare un mélange en ses composants et mesure chacun séparément.
Spectroscopie
FTIR, Raman, UV-Vis et émission optique. Pour l’identité des matériaux, l’identification des groupes fonctionnels et la composition de l’alliage.
Analyse thermique
DSC, TGA, DMA et dilatométrie. Températures de transition, composition, décomposition et comportement dimensionnel.
Microscopie et imagerie
Microscopie optique, SEM-EDS, radiographie et tomographie. Structure, défauts et distribution élémentaire.
Chimie classique (par voie humide)
Titrage, gravimétrie et colorimétrie. Utilisé comme méthode de référence et pour confirmer les résultats instrumentaux.

Confusions fréquentes dans ce domaine

XRF est un outil de dépistage ; il voit les éléments et ne distingue pas les composés. Une décision concernant un composé restreint nécessite une confirmation par chimie humide.
L'expression « non détecté » n'est pas une preuve d'absence ; elle se lit avec la limite de détection de la méthode.
La spécification lie la méthode. Une méthode techniquement meilleure n’est pas acceptée si la spécification en appelle une autre.
La préparation des échantillons fait partie du résultat ; un rapport qui ne mentionne pas la préparation n'est pas reproductible.
Les résultats obtenus par différentes techniques ne peuvent pas être comparés directement ; leurs limites de détection et leurs incertitudes diffèrent.
Une page de méthode n’est pas une page de test ; quelle méthode s'applique à quel test provient de la norme de produit.

Quelles décisions ces résultats étayent

Faire correspondre la méthode du cahier des charges au périmètre du laboratoire
Choix de la méthode selon la limite de détection et la compatibilité matricielle
Confirmation d'un résultat instrumental par une méthode de référence
Élimination des écarts liés à la préparation des échantillons

Tests associés

Questions fréquentes sur LC-MS — analyse

Quelle est la différence entre LC-MS et LC-MS/MS ?

LC-MS effectue une seule mesure de masse. LC-MS/MS sélectionne et fragmente l'ion précurseur et surveille les ions produits ; il est beaucoup plus sélectif et possède une limite inférieure de quantification dans les matrices complexes.

Pourquoi un tampon volatile est-il nécessaire ?

Les sels non volatils s'accumulent dans la source d'ions, supprimant le signal et contaminant l'instrument. Des tampons volatils tels que l'acide formique ou l'acétate d'ammonium sont donc utilisés.