¿Qué es LC-MS — análisis?
LC-MS es una técnica híbrida en la que los componentes separados por cromatografía líquida se transfieren a un espectrómetro de masas a través de una interfaz (normalmente ionización por electropulverización). La cromatografía proporciona separación y la medición de masa proporciona identificación mediante masa molecular.
Objetivo de LC-MS — análisis
El propósito es separar e identificar compuestos no volátiles, polares o térmicamente lábiles que no pueden analizarse mediante GC. Con esta técnica se estudian péptidos, proteínas, metabolitos de fármacos y residuos polares.
¿A qué productos se aplica LC-MS — análisis?
- Ingredientes activos farmacéuticos y sus metabolitos.
- Niveles de fármacos en muestras biológicas.
- Residuos polares de pesticidas y medicamentos veterinarios en los alimentos
- Micotoxinas
- Caracterización de péptidos y proteínas.
¿En qué sectores se utiliza LC-MS — análisis?
Normas relacionadas con LC-MS — análisis
- ICH Q2(R2) (validación de procedimientos analíticos)
- Farmacopea Europea 2.2.43 (espectrometría de masas)
- EN 15662 (QuEChERS ekstraksiyonu)
- UE 2021/808 (rendimiento de métodos de residuos de medicamentos veterinarios)
Condiciones de LC-MS — análisis
- ionización
- La ESI es común; Se prefiere APCI en compuestos no polares.
- Polarite
- Modo de iones positivos o negativos, según el analito
- Hareketli faz
- Se requiere buffer volátil; No se utilizan sales que interrumpan la ionización.
- Matris etkisi
- Se debe evaluar la supresión de iones; Se recomienda calibración con coincidencia de matriz
Equipo para LC-MS — análisis
- Sistema HPLC/UPLC
- Electrospray o fuente de iones APCI
- Analizador de masas (cuadrupolo simple o de alta resolución)
- Sistema de vacío y generador de nitrógeno.
- software de procesamiento de datos
Requisitos de muestra para LC-MS — análisis
- La muestra debe hacerse soluble en un tampón volátil.
- Debe estar libre de sales y detergentes que alteren la ionización.
- La precipitación de proteínas o SPE se aplica a muestras biológicas.
- La muestra debe enviarse en la cadena de frío.
Duración de LC-MS — análisis
Una carrera suele durar menos de 30 minutos. Si se requiere el desarrollo de métodos y la evaluación del efecto de la matriz, la duración total se extiende significativamente.
Procedimiento de LC-MS — análisis
- 1La muestra se extrae y se limpia de componentes que interfieren.
- 2Se añade un estándar interno.
- 3La separación se realiza en la columna LC.
- 4La salida de la columna se alimenta a la fuente de iones y se ionizan los componentes.
- 5Se registra el espectro de masas.
- 6La identificación se realiza mediante acuerdo de masa y tiempo de retención.
- 7La cuantificación se calcula mediante el estándar interno.
Criterios de aceptación de LC-MS — análisis
Un método produce un resultado; no pone un límite. Si el resultado es aceptable lo determina la regulación o especificación a la que está sujeto el producto.
Evaluación de resultados
La supresión de iones es la fuente de error más importante en LC-MS; por lo tanto, se utiliza un patrón interno y, cuando sea posible, un patrón marcado con isótopos. La confiabilidad del resultado depende de que el efecto de la matriz se haya medido durante la validación del método.
Informe de LC-MS — análisis
- Descripción de la muestra, fecha de recepción y número de laboratorio.
- Método aplicado y estándar de referencia, si lo hubiera.
- Condiciones del instrumento y de medición.
- Pasos de preparación de muestras
- Resultados de medición y unidades.
- Incertidumbre de medición (si se solicita)
- Una declaración de que los resultados se relacionan únicamente con la muestra enviada para la prueba.
Acreditación
EUROLAB posee una acreditación reconocida internacionalmente obtenida de organismos de acreditación que forman parte de los acuerdos de reconocimiento multilateral de IAF e ILAC, según ISO/IEC 17025 para pruebas de laboratorio, ISO/IEC 17020 para inspección y vigilancia, e ISO/IEC 17021-1 e ISO/IEC 17065 para certificación de sistemas y productos. Esta cadena garantiza que los informes y certificados emitidos sean aceptados en todo el mundo.
La posibilidad de ofrecer esta prueba dentro del alcance acreditado depende de su producto y del estándar aplicado; Dado que la acreditación se basa en métodos, el alcance se confirma por escrito en la etapa de cotización.
Alcance y autorizacionesRegulaciones Relacionadas
- UE 37/2010 (límites de residuos de medicamentos veterinarios)
- UE 2023/915 (contaminantes en alimentos)
- ICH M10 (validación del método bioanalítico)
Páginas donde se utiliza este método
Métodos analíticos — ¿Qué hace este grupo de métodos?
La siguiente sección describe el campo al que pertenece el ensayo LC-MS — análisis; las condiciones y criterios de aceptación de este ensayo en particular figuran en las secciones anteriores. El alcance específico de su producto se confirma por escrito en la etapa de cotización.
Las páginas de métodos analíticos son páginas sobre una TÉCNICA DE MEDICIÓN más que sobre un ensayo. Esta diferencia importa: «ensayo de niebla salina» es un ensayo y responde a una pregunta; «ICP-MS» es una técnica y se utiliza en decenas de ensayos distintos. A veces el usuario no busca el ensayo sino la técnica, porque el nombre del método es lo que aparece en su especificación.
Esta distinción se vuelve decisiva a la hora de elegir un laboratorio. Cuando un cliente pide un «análisis de metales pesados», la verdadera pregunta es con qué técnica se realizará: la XRF es rápida y no destructiva pero no distingue compuestos; la AAS es económica para un solo elemento; el ICP-OES detecta varios elementos; el ICP-MS ve niveles traza. La misma muestra da resultados con límites de detección e incertidumbres distintos en las cuatro técnicas.
La selección del método se realiza según tres criterios. LÍMITE DE DETECCIÓN: ¿está la concentración buscada dentro del rango que el método puede detectar? COMPATIBILIDAD DE MATRIZ: ¿es la matriz de la muestra (plástico, alimento, suelo, metal) una que el método pueda manejar, y se requiere pretratamiento? VÍNCULO CON LA ESPECIFICACIÓN: ¿exige la norma de producto o la legislación un método particular? El tercero suele prevalecer sobre los dos primeros: la especificación vincula el método.
Las páginas de métodos construyen una CADENA. Una técnica está vinculada a las páginas de prueba donde se utiliza, a las normas en las que se basan esas pruebas, a la legislación a la que están vinculadas esas normas y, en última instancia, a los regímenes de acceso a los mercados. La cadena de ejemplo en el documento fuente funciona así: XRF → análisis de metales → cumplimiento de RoHS → restricción de metales pesados → páginas de recubrimiento. Cualquiera que sea el enlace desde el que ingresa el usuario, llega a los demás.
La preparación de la muestra es la mitad invisible del resultado en esta familia y es una fuente de error mayor que la técnica misma. El método de digestión, el grado de molienda, el disolvente de extracción y la proporción de dilución modifican notablemente el resultado. La misma muestra en el mismo instrumento da un resultado diferente con una preparación diferente; Por lo tanto, la definición del método también incluye la preparación.
La calibración y la verificación son el tercer componente determinante. Se calibra un instrumento con material de referencia certificado, la curva de calibración se verifica periódicamente y se analiza una muestra de control en cada lote. Sin estos pasos, no se puede rastrear una cantidad producida incluso si el instrumento funciona correctamente.
Grupos de métodos en este campo
Análisis elemental
ICP-OES, ICP-MS, AAS y XRF. Se diferencian en el límite de detección, la tolerancia de la matriz y la capacidad de múltiples elementos.
Cromatografía
GC, GC-MS, HPLC, LC-MS/MS y cromatografía iónica. Separa una mezcla en sus componentes y mide cada uno por separado.
Espectroscopía
FTIR, Raman, UV-Vis y emisión óptica. Para identidad de materiales, identificación de grupos funcionales y composición de aleaciones.
Análisis térmico
DSC, TGA, DMA y dilatometría. Temperaturas de transición, composición, descomposición y comportamiento dimensional.
Microscopía e imagenología
Microscopía óptica, SEM-EDS, radiografía y tomografía. Estructura, defectos y distribución elemental.
Química clásica (húmeda)
Titulación, gravimetría y colorimetría. Se utiliza como método de referencia y para confirmar resultados instrumentales.
Confusiones frecuentes en este campo
- XRF es una herramienta de detección; ve elementos y no distingue compuestos. Una decisión sobre un compuesto restringido requiere confirmación mediante química húmeda.
- La expresión "no detectado" no es prueba de ausencia; se interpreta junto con el límite de detección del método.
- La especificación vincula el método. No se acepta un método técnicamente mejor si la especificación exige otro.
- La preparación de la muestra es parte del resultado; un informe que no indique la preparación no es reproducible.
- Los resultados obtenidos mediante diferentes técnicas no se pueden comparar directamente; sus límites de detección e incertidumbres difieren.
- Una página de método no es una página de prueba; qué método se aplica a qué prueba proviene de la norma del producto.
Qué decisiones respaldan estos resultados
- Correspondencia del método de la especificación con el alcance del laboratorio
- Selección del método según el límite de detección y la compatibilidad de la matriz
- Confirmación de un resultado instrumental con un método de referencia
- Eliminación de desviaciones derivadas de la preparación de la muestra
Pruebas relacionadas
Preguntas frecuentes sobre LC-MS — análisis
¿Cuál es la diferencia entre LC-MS y LC-MS/MS?
LC-MS realiza una única medición de masa. LC-MS/MS selecciona y fragmenta el ion precursor y monitorea los iones producto; es mucho más selectivo y tiene un límite inferior de cuantificación en matrices complejas.
¿Por qué se necesita un búfer volátil?
Las sales no volátiles se acumulan en la fuente de iones, suprimiendo la señal y contaminando el instrumento. Por ello se utilizan tampones volátiles como el ácido fórmico o el acetato de amonio.