¿Qué es Endotoxin?
La prueba de endotoxinas mide la cantidad de lipopolisacárido (endotoxina) que se origina en la pared celular de las bacterias Gram negativas. La endotoxina es resistente al calor: la esterilización mata la bacteria pero no destruye la endotoxina. Por lo tanto, un producto estéril puede seguir siendo pirógeno y debe probarse por separado.
Objetivo de Endotoxin
El objetivo es demostrar que el nivel de endotoxinas en los dispositivos que entran en contacto con el cuerpo a través del torrente sanguíneo, el líquido cefalorraquídeo o la implantación está por debajo del límite permitido.
¿A qué productos se aplica Endotoxin?
- Catéteres intravenosos y equipos de infusión.
- Implantes
- Equipos de diálisis
- Instrumentos y sets quirúrgicos.
- Dispositivos en contacto con líquido cefalorraquídeo.
¿En qué sectores se utiliza Endotoxin?
Normas relacionadas con Endotoxin
- PE 2.6.14
- USP <85>
- ANSI/AAMI ST72
- ISO 11737-3
Condiciones de Endotoxin
- Método
- Métodos LAL de gel-coagul, turbidimétrico o cromogénico
- Extracción
- Las superficies de contacto del producto con el cuerpo se extraen con agua libre de endotoxinas.
- Control de interferencias
- Se debe verificar que el producto no inhiba ni mejore la prueba.
Equipo para Endotoxin
- Kits de prueba y reactivos LAL
- Cristalería libre de endotoxinas
- Lector de microplacas (para métodos cinéticos)
- Horno de calor seco (para despirogenación)
- Incubadora con temperatura controlada
Requisitos de muestra para Endotoxin
- El producto final esterilizado.
- Se debe conocer la superficie de contacto con el cuerpo.
- El número de muestras se determina según la farmacopea y la información del lote.
- La muestra debe prepararse y transportarse en contenedores libres de endotoxinas.
Duración de Endotoxin
La prueba inicial, incluido el estudio de interferencia (inhibición/mejora), lleva varios días; Las pruebas de rutina son más cortas.
Procedimiento de Endotoxin
- 1Se calcula el límite de endotoxinas para el producto.
- 2Se realiza un estudio de interferencias o se hace referencia a un estudio existente.
- 3El producto se extrae con agua libre de endotoxinas.
- 4El extracto se mezcla con el reactivo LAL.
- 5Se incuba a la temperatura definida.
- 6Según el método, se mide la formación de coágulos, la turbidez o el desarrollo del color.
- 7La cantidad de endotoxina se calcula a partir de la curva estándar.
Criterios de aceptación de Endotoxin
El criterio de aceptación es el límite de endotoxinas calculado para el producto. Este límite se calcula mediante la fórmula definida en la farmacopea, en función de la vía de contacto del dispositivo y del peso del paciente; el límite es notablemente inferior para los dispositivos que están en contacto con el líquido cefalorraquídeo.
Evaluación de resultados
El resultado se compara con el límite calculado. Si el estudio de interferencia no es válido, el resultado no se puede interpretar; cuando el producto suprime la reacción LAL, se debe determinar un factor de dilución.
Informe de Endotoxin
- Farmacopea aplicada y método.
- Descripción de la muestra, lote y superficie.
- Límite de endotoxinas calculado
- Resultado del estudio de interferencia y factor de dilución.
- Valor de endotoxina medido (UE/dispositivo o UE/mL)
- Comparación con el límite
Acreditación
EUROLAB posee una acreditación reconocida internacionalmente obtenida de organismos de acreditación que forman parte de los acuerdos de reconocimiento multilateral de IAF e ILAC, según ISO/IEC 17025 para pruebas de laboratorio, ISO/IEC 17020 para inspección y vigilancia, e ISO/IEC 17021-1 e ISO/IEC 17065 para certificación de sistemas y productos. Esta cadena garantiza que los informes y certificados emitidos sean aceptados en todo el mundo.
La posibilidad de ofrecer esta prueba dentro del alcance acreditado depende de su producto y del estándar aplicado; Dado que la acreditación se basa en métodos, el alcance se confirma por escrito en la etapa de cotización.
Alcance y autorizacionesRegulaciones Relacionadas
- MDR (UE) 2017/745
- Requisitos de la farmacopea
Análisis farmacéutico — ¿Qué abarca este campo de ensayo?
La siguiente sección describe el campo al que pertenece el ensayo Endotoxin; las condiciones y criterios de aceptación de este ensayo en particular figuran en las secciones anteriores. El alcance específico de su producto se confirma por escrito en la etapa de cotización.
El análisis farmacéutico determina la identidad, la pureza, la cantidad y el comportamiento del principio activo del medicamento y del producto final. Lo que distingue a esta disciplina de las demás es que los métodos están definidos en gran medida en las farmacopeas: tanto la Farmacopea Europea (Ph. Eur.) como la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) establecen conjuntamente tanto el método como el marco de aceptación.
El carácter vinculante del método de la farmacopea determina la forma de trabajar en este ámbito. Mientras que en otros sectores el laboratorio puede elegir un método adecuado, aquí es obligatorio seguir el método descrito en la monografía; si se va a utilizar un método alternativo, es necesario demostrar su equivalencia. Esto garantiza que los resultados sean comparables en todo el mundo.
Los análisis se llevan a cabo en varios grupos. La identificación y la determinación cuantitativa (HPLC, UV, titulación) indican qué es el producto y qué cantidad de principio activo contiene. El perfil de impurezas y los residuos de disolventes detectan compuestos no deseados procedentes del proceso de fabricación. Las impurezas elementales abordan los metales procedentes de catalizadores y equipos. El comportamiento de disolución y dispersión es el indicador in vitro más importante en relación con el comportamiento de liberación del medicamento en el organismo.
El ENSAYO DE DISOLUCIÓN es una de las mediciones más importantes en este ámbito. No basta con que un comprimido contenga la cantidad adecuada de principio activo; es necesario que dicho principio activo se disuelva a la velocidad adecuada. El perfil de disolución se utiliza para evaluar el efecto de los cambios en la formulación sobre la biodisponibilidad y ocupa un lugar fundamental en la autorización de comercialización de los medicamentos genéricos.
La VALIDACIÓN DEL MÉTODO es un paso obligatorio en esta familia. Si se utiliza un método de la farmacopea, se comprueba que dicho método funciona correctamente en las condiciones de ese laboratorio. Si se ha desarrollado un método propio, se valida mediante parámetros como la linealidad, la precisión, la exactitud, la selectividad, los límites de detección y de determinación, y la robustez. Los resultados obtenidos con un método no validado no pueden utilizarse en el expediente de autorización.
Los ensayos de estabilidad determinan la vida útil y constituyen el proceso más prolongado en este ámbito. El producto se mantiene en las condiciones de temperatura y humedad especificadas, se analiza a intervalos determinados y los resultados sirven de base para establecer la vida útil y las condiciones de conservación declaradas. Las condiciones aceleradas proporcionan información preliminar, pero los datos en tiempo real son fundamentales.
La parte microbiológica constituye un ámbito independiente: recuento de la carga microbiana, búsqueda de microorganismos específicos, ensayo de esterilidad en productos estériles y ensayo de endotoxinas bacterianas. En el caso de los productos estériles, también se tienen en cuenta la integridad del envase y la validación de la esterilización.
La integridad de los datos se ha convertido en el centro de las inspecciones en los últimos años. No basta con que el resultado sea correcto; los datos brutos deben ser trazables, inalterables y auditables. La validación de los sistemas de registro electrónico se ha convertido, por tanto, en una parte inseparable del análisis.
Grupos de métodos en este campo
Identidad y valoración
HPLC, UPLC, espectrofotometría UV-Vis, valoración, confirmación de identidad por FTIR.
Impurezas y residuos
Impurezas relacionadas, productos de degradación, disolventes residuales (GC-headspace), cribado de nitrosaminas.
Impurezas elementales
Determinación de impurezas elementales por ICP-MS e ICP-OES y evaluación de riesgo asociada.
Fisicoquímico
Disolución y desintegración, dureza, friabilidad, uniformidad de unidades de dosificación, contenido de agua (Karl Fischer), tamaño de partícula.
Microbiológico
Recuento microbiano, microorganismos especificados, esterilidad, endotoxina bacteriana, eficacia del conservante.
Estabilidad
Estudios de estabilidad en tiempo real y acelerada; fotoestabilidad y estabilidad en uso.
Confusiones frecuentes en este campo
- El método farmacopeico es vinculante; un método alternativo solo puede usarse demostrando su equivalencia.
- Un resultado producido sin validación del método no puede usarse en un expediente de registro.
- La estabilidad acelerada no sustituye a los datos en tiempo real; la vida útil se respalda con resultados en tiempo real.
- El perfil de disolución es sensible al tipo de aparato, la velocidad de agitación y el medio; las condiciones deben estar completas en el informe.
- Una deficiencia en la integridad de los datos genera una no conformidad en una inspección, incluso si el resultado es correcto.
- Un cambio de formulación o proveedor requiere comparación analítica y, si es necesario, un nuevo estudio de estabilidad.
Qué decisiones respaldan estos resultados
- El expediente de registro y la liberación de lotes
- Determinación de la vida útil y las condiciones de almacenamiento
- Transferencia de método y validación de método
- Control de aceptación de materias primas entrantes de proveedores
- Evaluación del efecto de un cambio de formulación en la bioequivalencia
Pruebas relacionadas
Preguntas frecuentes sobre Endotoxin
Mi producto es estéril. ¿Por qué es necesaria una prueba de endotoxinas?
La endotoxina es resistente al calor; aunque la esterilización mata la bacteria, no descompone la endotoxina, que es un residuo de la pared celular. Por lo tanto, un producto estéril aún puede provocar una reacción pirógena y las endotoxinas deben medirse por separado.
¿Cómo se determina el límite de endotoxinas?
Se calcula mediante la fórmula definida en la farmacopea, en función de la vía de contacto del dispositivo y de la dosis permitida. Para los dispositivos en contacto con el líquido cefalorraquídeo, el límite es mucho menor; el cálculo debe constar en el informe.