ما هو E. coli؟
يجيب تحليل الإشريكية القولونية على سؤالين منفصلين. يعطي COUNT (ISO 16649) العدد الإجمالي للإشريكية القولونية كمؤشر للتلوث من البراز. يقوم اختبار STEC DETECTION (ISO 13136) بالتحقق من وجود المجموعات المصلية المسببة للأمراض التي تنتج سموم شيجا بطريقة تعتمد على تفاعل البوليميراز المتسلسل؛ وهذا تحليل أمني ولا ينبغي الخلط بينه وبين التعداد السكاني.
الغرض من E. coli
الهدف هو الكشف عن التلوث البرازي والتحقيق في وجود سلالات الإشريكية القولونية المسببة للأمراض. نظرًا لأن STEC يمكن أن يسبب مرضًا خطيرًا حتى بأعداد صغيرة، فإنه يتم التعامل معه على أنه سؤال حضور/غياب، وليس بمثابة إحصاء.
على أي منتجات يُطبَّق E. coli؟
- منتجات اللحوم النيئة وغير المطبوخة جيدًا
- الحليب الخام والأجبان المنتجة من الحليب الخام
- الفواكه والخضروات الطازجة والبراعم
- مياه الشرب والمنزلية
- منتجات الوجبات الجاهزة
في أي قطاعات يُستخدم E. coli؟
المواصفات المتعلقة بـ E. coli
- TS ISO 16649-1/-2/-3 (عدد بيتا جلوكورونيداز الإيجابي للإشريكية القولونية)
- TS EN ISO 9308-1 (الإشريكية القولونية والقولونيات في الماء — الترشيح الغشائي)
- TS EN ISO 13136 (اكتشاف STEC — PCR في الوقت الحقيقي)
- سلسلة TS EN ISO 6887 (تحضير العينة)
شروط E. coli
- التعداد
- في وسط انتقائي، عند درجة الحرارة والوقت المحددين في المعيار
- STEC
- فحص جينات stx و eae بواسطة PCR بعد التخصيب
- تَحَقّق
- العزلة الثقافية في عينات PCR إيجابية
جهاز E. coli
- خزانة وحاضنات معقمة
- نظام PCR في الوقت الحقيقي
- جهاز الفصل المناعي المغناطيسي
- Membran filtrasyon sistemi
- عداد مستعمرة
متطلبات العينة لـ E. coli
- ويجب إرسال العينة غير مفتوحة وفي عبوتها الأصلية، مع الحفاظ على سلسلة التبريد. ما إذا كانت طريقة أخذ العينات تمثل الدفعة يحدد صحة النتيجة؛ النتيجة من وحدة واحدة ليست كافية لاتخاذ قرار بشأن الحزب.
- في تحليل STEC، يجب أن تكون كمية العينة عند المستوى المحدد في المعيار.
- يجب تسليم عينات المياه في وعاء معقم وخلال فترة زمنية محددة.
- يجب تحديد خطة أخذ العينات وفقًا لفئة المنتج
مدة E. coli
يستمر العد طوال فترة الحضانة. هناك خطوات تخصيب وPCR في تحليل STEC؛ في العينات الإيجابية لتفاعل PCR، يؤدي التأكيد الثقافي إلى إطالة الوقت بشكل كبير.
إجراء E. coli
- 1يتم تحضير العينة بطريقة معقمة.
- 2للعد، يتم زرعها في وسائل الإعلام الانتقائية واحتضانها.
- 3يتم عد المستعمرات النموذجية والتحقق منها إذا لزم الأمر.
- 4بالنسبة لـ STEC، يتم إثراء العينة.
- 5يتم تطبيق استخراج الحمض النووي وPCR في الوقت الحقيقي.
- 6في حالة وجود نتائج إيجابية، يتم إجراء العزل والتنميط المصلي.
معايير قبول E. coli
بالنسبة لـ STEC (EC) 2073/2005 يحدد معايير سلامة الأغذية في بعض فئات الأغذية وهذا معيار الحضور/الغياب. يعتبر عدد الإشريكية القولونية معيارًا للنظافة العملية. معايير القبول هي معايير ميكروبيولوجية محددة على أساس فئة الأغذية في (الاتحاد الأوروبي) 2073/2005. وتميز اللائحة بين نوعين من المعايير: معيار سلامة الغذاء (هل يمكن طرح المنتج في السوق) ومعيار نظافة العملية (هل عملية الإنتاج تحت السيطرة). ويعتمد الخيار الذي ينطبق على فئة المنتج ويتم تأكيده من خلال نص اللائحة المعمول بها.
تقييم النتائج
لا يعني انخفاض عدد الإشريكية القولونية عدم وجود STEC: يمكن للسلالات المسببة للأمراض أن تسبب المرض بأعداد منخفضة جدًا وقد لا تظهر في العدد الإجمالي. يجيب التحليلان على أسئلة مختلفة ولا يمكن استبدالهما.
تقرير E. coli
- تحديد العينة ومعلومات الدفعة
- المعيار والطريقة المطبقة
- عد النتيجة وعدم اليقين في القياس
- نتائج PCR والجينات المستهدفة لـ STEC
- معلومات العزل والنمط المصلي في الحالات الإيجابية
الاعتماد
حصلت EUROLAB على اعتماد معترف به دوليًا تم الحصول عليه من هيئات الاعتماد الأطراف في ترتيبات الاعتراف المتعددة الأطراف IAF وILAC، بموجب ISO/IEC 17025 للاختبارات المعملية، وISO/IEC 17020 للتفتيش والمراقبة، وISO/IEC 17021-1 وISO/IEC 17065 لشهادة النظام والمنتجات. تضمن هذه السلسلة قبول التقارير والشهادات الصادرة في جميع أنحاء العالم.
تعتمد إمكانية تقديم هذا الاختبار ضمن النطاق المعتمد على منتجك والمعيار المطبق؛ وبما أن الاعتماد يعتمد على الطريقة، يتم تأكيد النطاق كتابيًا في مرحلة عرض الأسعار.
النطاق والتفويضاتاللوائح ذات الصلة
- (المفوضية الأوروبية) 2073/2005 لائحة المعايير الميكروبيولوجية
- (الاتحاد الأوروبي) 2020/2184 توجيه مياه الشرب
اختبارات الأغذية — ما الذي يغطيه مجال الاختبار هذا؟
يصف القسم أدناه المجال الذي ينتمي إليه اختبار E. coli؛ أما شروط ومعايير قبول هذا الاختبار تحديدًا فترد في الأقسام أعلاه. يتم تأكيد النطاق الخاص بمنتجكم كتابيًا في مرحلة العرض السعري.
تُظهر اختبارات الأغذية أن المنتج آمن للاستهلاك ويحتوي على ما هو مذكور على ملصقه. تعمل هذه العائلة على ثلاثة محاور: السلامة الميكروبيولوجية، والسلامة الكيميائية، والتركيب الغذائي. وتتطلب المحاور الثلاثة بنية مختبرية مختلفة، ومجموعة طرق مختلفة، ومدة قرار مختلفة.
أبرز سمة في هذا المجال هي ضغط الوقت. يمكن لعينة من الفولاذ أن تنتظر على الرف؛ أما عينة الحليب الخام أو اللحم الطازج فلا يمكنها ذلك. فوقت أخذ العينة ودرجة حرارة النقل ومدة الوصول إلى المختبر تحدد مباشرة صلاحية النتيجة. لذلك يُعد سجل سلسلة التبريد في ميكروبيولوجيا الأغذية جزءًا لا يتجزأ من تقرير الاختبار.
على الجانب الميكروبيولوجي، هناك سؤالان مختلفان يجب عدم الخلط بينهما. الكشف عن مسبب مرضي سؤال نوعي: هل توجد السالمونيلا في العينة أم لا؟ أما عد الكائنات الدليلية فهو سؤال كمي ومؤشر على نظافة الإنتاج. عدم وجود مسبب مرضي في منتج لا يدل على أن النظافة جيدة؛ فإذا كان العدد الكلي للهوائيات المعتدلة الحرارة مرتفعًا، فهناك مشكلة في العملية.
على الجانب الكيميائي، تُقاس بقايا المبيدات والسموم الفطرية والمعادن الثقيلة والمضافات وبقايا الأدوية البيطرية وملوثات العملية (الأكريلاميد والفوران ومركبات PAH). ويمكن لطرق البقايا المتعددة في هذا المجال (LC-MS/MS وGC-MS/MS القائمة على QuEChERS) فحص مئات المواد الفعالة في تحليل واحد؛ وتُحدَّد الحدود بشكل منفصل لكل زوج منتج-مادة.
على جانب التركيب، تُحدَّد البروتينات والدهون والرطوبة والرماد والألياف ونسبة السكر وتركيب الأحماض الدهنية ومحتوى الفيتامينات والمعادن. وتُشكِّل هذه القيم أساس البيان الغذائي على الملصق، وتُحدَّد نطاقات التفاوت في التشريع - ويجب أن يبقى الفرق بين القيمة المعلنة والقيمة المقاسة ضمن هذا التفاوت.
لا توجد علامة CE على الأغذية، وهذا يحدد طريقة عمل هذا المجال. تُثبت المطابقة من خلال تشغيل نظام سلامة غذائية قائم على HACCP، والامتثال لقواعد وضع العلامات، وعدم تجاوز حدود الملوثات والبقايا والحدود الميكروبيولوجية. لا تُنتج نتيجة الاختبار دليلًا لشهادة بل لنظام يعمل بفعالية.
لإدارة مسببات الحساسية أهمية خاصة. ووجود مسبب حساسية غير معلن في منتج هو أحد الأسباب الأكثر شيوعًا لسحب المنتجات الغذائية. ويسير التحليل هنا جنبًا إلى جنب مع التحقق من التنظيف: إذ يُثبت أن الخط قد نُظِّف بشكل كافٍ بعد دورة إنتاج تحتوي على مسبب حساسية وأن خطر التلوث المتبادل تحت السيطرة.
أصبحت المخططات الطوعية في هذا المجال إلزامية بحكم الأمر الواقع. وتطلب سلاسل البيع بالتجزئة من مورديها الحصول على شهادة بموجب مخطط معترف به من GFSI (مثل BRCGS وIFS وFSSC 22000)؛ ودون ذلك، يكاد يكون الوصول إلى الرف مستحيلاً عمليًا.
مجموعات الطرق في هذا المجال
الكشف عن مسببات الأمراض
الكشف عن السالمونيلا وListeria monocytogenes وCampylobacter وCronobacter وE. coli المنتجة لسموم شيغا؛ بالطرق القائمة على الاستنبات والطرق الجزيئية.
أعداد الكائنات الدليلية
العدد الكلي للهوائيات المعتدلة الحرارة، وEnterobacteriaceae، والقولونيات وE. coli، والمكورات العنقودية الموجبة للكواغولاز، والخمائر والعفن، وبكتيريا حمض اللاكتيك، والمطثيات المختزلة للكبريتيت.
بقايا المبيدات والأدوية البيطرية
فحص متعدد البقايا بواسطة LC-MS/MS وGC-MS/MS مع استخلاص QuEChERS.
السموم الفطرية والملوثات
الأفلاتوكسينات وأوكراتوكسين A ودي أوكسينيفالينول والباتولين؛ والمعادن الثقيلة (ICP-MS) والأكريلاميد ومركبات PAH.
التركيب الغذائي
بروتين كلداهل، وتركيب الدهون والأحماض الدهنية، والرطوبة، والرماد، والألياف الغذائية، ونسبة السكر، وتحليلات الفيتامينات والمعادن.
مسببات الحساسية والأصالة
تحليلات مسببات حساسية الغلوتين والحليب والبيض والمكسرات وفول الصويا؛ وطرق جزيئية لتحديد الأنواع والكشف عن الغش.
أمور يشيع الخلط بينها في هذا المجال
- أخذ العينة نصف النتيجة. فالعينة المنقولة في درجة حرارة خاطئة أو المتأخرة تعطي نتيجة غير صالحة حتى لو حُلِّلت بشكل صحيح في المختبر.
- عدم وجود مسبب مرضي لا يدل على أن النظافة جيدة؛ فأعداد الكائنات الدليلية تعطي معلومة منفصلة وتُقرأ الاثنتان معًا.
- لا يمكن تعميم نتيجة عينة مأخوذة من دفعة على الدفعة بأكملها إلا إذا كانت خطة أخذ العينات موضوعة إحصائيًا.
- تُحدَّد الحدود في لوائح منفصلة حسب فئة المنتج وتُحدَّث بانتظام؛ وقد يكون قرار المطابقة المستند إلى جدول حدود قديم خاطئًا.
- في التصدير، قد تختلف حدود بلد الوجهة عن حدود الاتحاد الأوروبي؛ فقد يكون المنتج نفسه مطابقًا في سوق وغير مطابق في سوق آخر.
ما القرارات التي تدعمها هذه النتائج
- التحقق من خطة HACCP ومراقبة العملية
- أساس البيان الغذائي ومعلومات مسببات الحساسية على الملصق
- شهادات صحية قبل التصدير والامتثال لحدود السوق المستهدف
- مراقبة القبول حسب المورد والدفعة
- دراسات مدة الصلاحية وتحديد شروط التخزين
- إنتاج أدلة لعمليات تدقيق المخططات المعترف بها من GFSI
الاختبارات ذات الصلة
الأسئلة الشائعة حول E. coli
نتيجة PCR إيجابية، هل المنتج ملوث بالتأكيد؟
يشير PCR إلى وجود الجين المستهدف؛ ولا يثبت وحده وجود بكتيريا حية. ولذلك فإن المعيار يتطلب التحقق عن طريق العزلة الثقافية من النتائج الإيجابية. يتم أخذ نتيجة التحقق كأساس للقرار النهائي.